2024/04/11 15:59
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美析UV1500PC可见分光光度计
型号: UV1500PC
产地: 上海
品牌: 美析仪器
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引言
风车子(Combretum alfredii hance)为使君子科风车子属植物,别名水番桃、清凉树、华风车子、四角风,分布于江西、湖南、广东、广西等地 。风车子属植物的根、茎、叶、花和种子均可入药,在不同地区被当作民间药广泛用于治疗肝炎、痢疾、呼吸道感染甚至癌症。现代药理研究表明该属植物具有保肝、抗炎、杀菌、抗癌和抗艾滋病等作用 ,其化学成分主要以二苯乙烯类、三萜化合物及菲类化合物为主,此外还有大环内酯类、黄酮类、脂肪酸类、生物碱类和甾体类化合物等。
黄酮类成分可能是风车子属植物的主要药效成分之一,但目前对风车子黄酮类化合物的研究相对较少,本论文拟用紫外可见分光光度法测定风车子中总黄酮的含量,建立风车子总黄酮含量比色测定的方法,为风车子的进一步开发利用奠定理论基础。
仪器与试剂
高速万能粉碎机,
十万分之一电子天平,
数控超声波清洗器,
紫外 - 可见分光光度计(UV1500,上海美析仪器有限公司),
旋转蒸发仪,
超纯水系统。
芦丁对照品(中国食品药品检定研究院,批号 :100080-201610),
超 纯 水(自制 ),
乙 醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH 等试剂均为分析纯。
风车子(市售)经赣南医学院彭金年副教授鉴定为使君子科风车子属植物风车子(Combretum alfredii hance)。
方法与结果
对照品溶液制备
精密称取105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品20 mg,用60 % 乙醇溶解定容至100 mL,配制成0.2 mg/mL的芦丁对照品溶液。
供试品溶液制备
将风车子60 ℃烘干,用高速万能粉碎机粉碎,过40目药筛。精密称取1.000 g,置于250 mL 圆底烧瓶中,加入60% 乙醇后,置于超声波清洗机中进行提取(料液比1:34,提取时间60分钟 ),抽滤,滤渣同法再提取2次,合并滤液,用旋转蒸发仪浓缩至适量,转移至50 mL 容量瓶,以60% 的乙醇定容至刻度,得风车子供试品溶液。
标准曲线绘制
精密吸取芦丁对照品溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10 mL,分别置于50 mL 容量瓶中,各加60% 乙醇溶液至12 mL,分别加入5% 亚硝酸钠溶液2 mL,摇匀,放置6 min,加入10% 硝酸铝溶液2 mL,摇匀后放置6 min,加入 4% 氢氧化钠溶液 20 mL,摇匀后放置5 min,加60% 乙醇溶液至刻度,摇匀后放置15 min。
测量波长的确定 :以未加芦丁对照品溶液的第1瓶溶液作空白,对加入8.0 mL 芦丁对照品溶液的第5瓶溶液在350~600 nm 范围内进行光谱扫描,得芦丁对照品显色后的吸收曲线 ;同法对风车子供试品溶液适量显色处理后扫描,得到风车子样品显色后的吸收曲线,结果见图1。对比芦丁对照品和风车子样品的吸收曲线,选择508 nm 为定量测量波长 。
以未加芦丁对照品溶液的第1瓶溶液作空白,在定量波长508 nm 处测定各溶液的吸光度,以芦丁浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,线性拟合得回归方程
y=8.652x-8.524E-4(R2=0.9986),线性范围0.008~0.040 mg/mL,见图2。
风车子总黄酮含量测定
取风车子供试品溶液0.5 mL,置于50 mL容量瓶中,依 2.3 项下方法依次加入显色剂,在508 nm 测定其吸光度,重复测定3次,以吸光度平均值根据回归方程计算风车子黄酮含量。
结论与讨论
风车子中黄酮类化合物经超声提取、硝酸铝显色后,可用紫外 - 可见分光光度法在508 nm 下定量测定。线性拟合得回归方程 y=8.652x-8.524E-4(R2=0.9986),线性范围0.008~0.040 mg/mL,测得赣南风车子中黄酮含量为(58.42±0.19)mg/g(n=3),该方法操作简便、快捷、高效、结果准确、精密度和稳定性好,杂质干扰少。风车子是江西赣南地区的特色中药材之一,开发利用风车子对促进赣南特色中药材发展具有一定的意义,本文建立了超声提取、紫外 - 可见分光光度法测定风车子总黄酮含量的测定方法,可为开发利用赣南风车子总黄酮提供定量分析方法。
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