分光光度法测定虾青素

建立一种快速测定化学合成虾青素含量的分光光度分析方法。采用经氢醌处理的三氯甲烷做为提取溶液，在489 nm 波长下测定吸光度，该分光光度法的标准曲线回归系数是0.9999 ，相对标准偏差为 0.36% ，加标回收率为99.8%~102.5% ，表明该分析方法准确性高、重复性好，且简便、快速，可以作为企业大批量生产中虾青素的测定方法。

虾青素是一种广泛存在于生物体的非维生素A源类胡萝卜素。 在水生动物虾、蟹、鱼和鸟类的羽毛中发挥调节色素沉积并显色的作用。 虾青素被广泛应用于鱼虾等水产养殖动物的饲料添加剂，以补充人体内虾青素的缺乏。 虾青素是类胡萝卜素合成的最高级别产物，具有明显的抗氧化、消除活性单线态氧的作用。 因此在食品、化妆品、保健品领域也有着广泛的应用前景。从动植物及菌类中提取的虾青素，由于其虾青素含量较低及检测限值低的原因，基本采用液相色谱分析法。 而目前市场上鱼饲料中的虾青素90% 是化学合成得到， 国内尚未见有系统的对化工合成的虾青素含量检测的研究报道。 本文研究参考国外对虾青素理化性质的报道，采用紫外分光光度法对化学合成虾青素的含量进行检测，结果满意可行。

实验原理

虾青素是由四个异戊二烯单位以共轭双键形式链接，两端又有两个异戊二烯单位组成六节环结构的化合物，虾青素分子结构中的这种共轭双键体系及离域化的 π 电子，在可见光区表现出强吸收带，且每种类胡萝卜素分子的最大吸收峰位置与紫外可见光光谱的精细结构都是具有特征性的。 由于类胡萝卜素分子的这种光吸收性质，溶液中的类胡萝卜素一般服从 beer-lambert定律，所以通过分光光度法可以实现对虾青素精确的定量分析。

实验仪器

双光束紫外分光光度计

电子天平

超声波清洗器

恒温水浴装置

离心机

氮气吹干

石英比色皿

试剂

BHT （ 2,6- 二叔丁基 -4- 甲基苯酚）

三氯甲烷

二氯甲烷

碳酸氢钠

氢醌

硫代硫酸钠

三氯甲烷处理方法：分别称取0.1 g碳酸氢钠、硫代硫酸钠、氢醌和BHT置于500mL 的棕色容量瓶， 加入三氯甲烷至刻度，摇匀超声 30 min 后过滤待用。

试验溶液：准确称取虾青素样品 40 mg （准确至 0.0002 g ），置于 250 mL 的棕色容量瓶， 加入 10 mg BHT ，加入 50 mL 二氯甲烷溶解， 在热水浴中超声 5 min ，流水冷却至室温； 再加入 100 mL 三氯甲烷继续超声 5 min 溶解，冷却至室温，然后用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即为待测溶液。

实验方法

工作曲线的绘制

精密称取待测虾青素溶液适量，用三氯甲烷溶剂溶解， 配置成浓度为 1.0 μg/mL 、 2.0 μg/mL 、3.0 μg/mL 、 4.0 μg/mL 、 5.0 μg/mL 、 6.0 μg/mL 的系列标准溶液， 用 UV8500 紫外分光光度计测定不同波长下的吸光度。 在最大波长下，以三氯甲烷试剂空白调零，测定吸光度。 以虾青素标准溶液的浓度为横坐标，对应吸光度值为纵坐标进行线性回归、绘制标准工作曲线

实验步骤

准确移取待测溶液 A 1.0 mL 于 50 mL 棕色容量瓶中， 用处理过的三氯甲烷 （三氯甲烷加0.02% 氢醌振摇后过滤）稀释至刻度，摇匀，得溶液 B 。 准确移取试验溶液 1.0 mL 于 50 mL 棕色容量瓶中，用处理后的三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。用紫外—可见光分光光度计测定溶液 B 在波长 489 nm 处的吸光度（ 1 cm 石英比色皿）。 以处理后的三氯甲烷为空白对照。