集成膳食纤维总量检测试剂盒(包括抗性淀粉和不易消化的低聚糖)

1.简介

膳食纤维是复杂有机物的混合物，包括亲水化合物（如可溶性或不溶性多糖）和不能被消化的低聚糖以及一些不可膨胀，或多或少疏水化合物（如角质素、软木脂和木质素）。该试剂盒应用于所有含膳食纤维(包括抗性淀粉和不易消化的低聚糖)的样品，如谷物、果蔬、谷物水果制品及食品。

2.检测原理

集成膳食纤维检测步骤（AOAC方法 2009.01）用于检测总膳食纤维，包括抗性淀粉（RS）和低分子量可溶性膳食纤维（LMWSDF）（DP>3）。该方法结合AOAC 2002.02，985.29，991.43和2001.03。用胰α-淀粉酶（PAA）和淀粉葡糖苷酶（AMG）在37℃震荡水浴锅中孵育样品（复样）16小时，在该步骤中，非抗性淀粉被溶解并水解为D-葡萄糖和麦芽糖。

通过调节pH和短暂加热终止反应。样品中的蛋白在蛋白酶的作用下变性并消化。不同的膳食纤维分别按如下方法测定：

测定可溶性膳食纤维（IDF），高分子量可溶性膳食纤维（HMWSDF）和低分子量可溶性膳食纤维（LMWSDF）

过滤水相反应混合物得到IDF，将残留物洗涤、干燥和称重。滤液中的HMWSDF被乙醇或工业酒精（IMS）沉淀，回收、干燥并称重。计算IDF和HMWSDF需要用蛋白、灰分和空白值对IDF和HMWSDF进行校正。将HMWSDF的水相乙醇滤液浓缩、脱盐、重新浓缩，用HPLC法测定LMWSDF。

高分子量膳食纤维总量（HMWDF）和低分子量水溶性膳食纤维总量（LMWSDF）

向孵育混合物中加入四倍体积的95%乙醇，同时不断搅拌。HMWSDF从孵育混合物中沉淀出来，将悬浮液过滤。洗涤、干燥并称量坩埚，得到HMWDF（包含IDF和HMWSDF）。计算最终结果时，需要对残留物进行蛋白、灰分和空白值的校正。将水相乙醇滤液浓缩、脱盐、再浓缩，然后用HPLC方法分析LMWSDF。

总膳食纤维的检测采用经过干燥和脱脂（如果脂肪含量>10%）的材料为样品（进行复样检测）。在100℃下用具有热稳定性的α-淀粉酶处理样品，使淀粉成胶状、水解和解聚；用蛋白酶（使蛋白溶解和解聚）和淀粉葡糖苷酶（将淀粉碎片水解成葡萄糖）在60℃下处理；然后用4倍体积的乙醇进行处理以沉淀可溶性膳食纤维，去除解聚的蛋白和葡萄糖（来自淀粉）。最后残留物分别用78%乙醇，95%乙醇和丙酮洗涤，干燥，称重。其中一份复样用于蛋白分析，另一份在525℃下孵育以测定灰分，膳食纤维的总量即为被过滤和干燥的残留物的重量减去蛋白和灰分的重量。

该试剂盒中的酶为高纯度酶，不具有β-葡聚糖酶、果胶酶和阿拉伯糖基木聚糖酶的活力。不易消化的低聚糖（NDO），如低聚果糖（FOS）和低聚半乳糖（GOS）不被水解，葡聚糖Polydextrose和Fibeisol-2的水解程度与供应商提供的信息一致。

为确保具有所需酶的活力，不具备不需要的酶的活力，按照整个流程分析下表中的样品（K-TDFC）。每批次酶应重新检测，或超过6个月没有检测时应重新检测。