爱尔兰Megazyme葡聚糖酶（纤维素酶）检测底物使用说明书

1.原理

该方法用于特异性检测纤维素酶制剂中的葡聚糖酶（内切纤维素酶）。孵育染色的纤维素和纤维素酶，底物通过内部作用被解聚产生低分子量的染色片段，之后在反应混合物中加入沉降剂，通过离心方法去除大分子量物质，测定上清液的颜色，参照标准曲线可以确定分析溶液中的内切纤维素酶。

2．底物

底物采用的是部分解聚的染色的羧甲基纤维素-4M，用蓝色染料R染色多聚糖，大约1个染料分子连接20个糖基。

3．溶解

将2g粉状底物加入到带加热板和磁力搅拌棒搅拌的80mL剧烈沸腾的水中，之后关闭加热板，继续搅拌直到溶液/浆液匀质（大约20分钟），再加入5mL乙酸钠缓冲液（2M，pH4.5），冷却溶液到室温。调节pH为4.5，定容到100mL。该溶液可以储存在4℃下，在此条件下，并且不被内切纤维素酶污染时，该溶液可以稳定保存至少12个月。下次使用前，剧烈震荡储存瓶子将底物溶液混合。该溶液是粘性的，应用容积式移液器移取（如Eppendorf Multipette® with a 5.0 mL Combitip）。

4.沉淀剂溶液

用150mL去离子水溶解40g三水乙酸钠和4g乙酸锌，用5MHCL溶液调节pH值到5.0，用去离子水定容到200mL。将这200mL溶液加到800mL工业甲基化酒精（IMS, 95 %）或酒精（95 %）中，混合均匀，用密封良好的瓶子储存在室温条件下。