Toyopearl亲和填料产品资讯

全球医药品销售额排行前100种产品中，生物药占据了50%，而抗体药更是在销售额排行的前20种药品中占了9种。近年来，医药界正在研发小分子抗体，这种抗体不但保持了抗体的高度特异性，其分子量还小于完整的抗体。小分子抗体有许多种类，除了抗体片段（Fab）以外，在利用基因工程技术制备的人工抗体中，还有单链抗体（scFv）、串联单链抗体（tandem scFv）、更为单纯的双链抗体(diabody)等。

这些小分子抗体不含有Fc片段，所以无法用Protein A填料进行亲和纯化。因此，使用与Fab片段的Kappa轻链（kappa Light chain）结合的Protein L填料，能够有效进行亲和纯化。TOYOPEARL AF-rProtein L-650F具有抗体吸附载量高，耐碱性优异的特点。可用0.1 mol/L NaOH溶液清洗，所以与传统的Protein L填料相比，更有利于提高生产能力和降低生产成本。

● 高载量型TOYOPEARL AF-rProtein L-650F的产品特性

● TOYOPEARL AF-rProtein L-650F的优势

・高吸附载量 ：是市售Protein L填料载量的约1.5倍

・提高耐碱性 ：可用0.1 mol/L NaOH清洗，可重复使用

・低配体脱落量 ：Protein L配基为多点结合，填料配基脱落率较低

・高速分离、处理 ：填料骨架刚性强，所以可用大口径柱进行高流速分离（驻留时间约为2-3分钟）

・提高生产能力 ：高载量、耐碱性，可在生产中降低填料的成本

・稳定提供 ：可确保稳定提供超过10 L的大量填料

・筛选用预装柱 ：提供1 mL和5 mL预装柱，用于工艺开发

● 使用Protein L填料纯化抗体分离单链抗体（scFv）和tandem scFv的分离条件举例：

吸附溶液：0.02-0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲溶液 (pH 6.5)

淋洗：

scFv、tandem scFv（CHO细胞培养液）：含有0.25-1 mol/L精氨酸和5-10 %异丙醇的吸附溶液

scFv（大肠杆菌的包涵体）：含有2 mol/L盐酸胍的吸附溶液*

洗脱：0.1 mol/L 柠檬酸或甘氨酸/HCl (pH 2.0-pH 3.0)

清洗：酸性溶液 pH 2.0-pH 2.2

CIP：   0.05–0.1 mol/L NaOH，接触时间为10–15分钟（限定使用浓度不超过0.1 mol/L NaOH水溶液）

（用0.1 mol/L NaOH水溶液浸泡9小时后，吸附量仍维持 90 %）

10–20 %乙醇和异丙醇也可有效去除疏水性杂质

* Reference：Tosoh Bioscience LLC Application Note, Capture of a scFv from E.coli using TOYOPEARL^® AF-rProtein L-650F

● 使用TOYOPEARL AF-rProtein L-650F纯化 CHO细胞培养液中tandem scFv抗体，对其吸附载量和淋洗的效果

Buffer; 0.1 mol/L sodium citrate buffer (pH 6.5)  LOD; Limit of detection

Column size; 1 mL

※使用添加精氨酸（Arg）和异丙醇（iPrOH）的溶液进行淋洗，有效去除了HCP、DNA等杂质。

● Protein L纯化后的层析步骤

在Protein L填料纯化后的下一个步骤中使用以下其他模式的填料，能够进一步有效去除杂质。

・离子交换填料 ：TOYOPEARL NH2-750F、Sulfate-650F（耐盐性离子交换填料）

・疏水填料 ：TOYOPEARL PPG-600M、Phenyl-600/650M、Butyl-600/650M、Hexyl-650C

・混合模式填料 ：TOYOPEARL MX-Trp-650M

● Protein L填料和筛选用预装柱产品一览表

※ 如需购买Protein L填料的配基脱落检测套装，请咨询我公司销售人员或代理。

※ 纯化完整的抗体，请使用高载量、耐碱型的TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F填料 。