Toyopearl阳离子填料产品资讯

抗体药物纯化工艺中最关键的第一步使用Protein A填料进行亲和分离。通过这一步，抗体纯度可达到95%左右。但作为抗体药物，纯度还远远不够，需要进行进一步纯化。主要杂质包括多聚体、抗体片段，来自宿主细胞的蛋白质（HCP）和DNA、病毒、以及自Protein A填料脱落下来的Protein A配基。这些杂质可以通过阴离子交换填料和阳离子交换填料（或混合模式填料）或疏水填料去除。除此之外，往往也会使用阳离子交换填料通过吸附、洗脱模式来进行抗体的纯化。

TOYOPEARL Sulfate-650F是一款具有硫酸根官能团的耐盐型阳离子交换填料。对抗体的吸附载量高，可以有效地去除多聚体，宿主细胞蛋白以及脱落的Protein A配基。

l 高载量・耐盐型阳离子交换填料Toyopearl Sulfate-650F的产品特性

・ 是一款具有耐盐性的（salt-tolerant）阳离子交换填料，在较高的盐浓度下对抗体也有较高的载量。

・ 填料的孔径大，可以有效去除抗体的多聚体、宿主细胞蛋白（HCP）以及其他杂质。

・ 具有很好的耐碱性，可以使用0.1 mol/L或者0.5 mol/L NaOH溶液重复对填料进行清洗和再生。

・ 可以有效地去除病毒。

・ 为了方便初期的填料筛选，配备了专门的ToyoScreen^®（1 mL， 5 mL）, MiniChrom^® （5 mL）预装柱。

l 使用吸附、洗脱模式纯化抗体

分离条件：                                                 

层析柱：Toyopearl Sulfate, 6.6 mmI.D.× 3.0 cm (1.0mL)

缓冲液：吸附 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.1 mol/L NaCl

洗脱 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.26 mol/L NaCl

洗脱 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.29 mol/L NaCl

洗脱 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.32 mol/L NaCl

清洗 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 1.0 mol/L NaCl

碱清洗 0.5 mol/L NaOH

流速   ：45 cm/hr （4分钟保留时间）

检测   ：UV (280 nm)

温度   ：室温

样品   ：通过Protein A层析后收集的单抗（19.1 g/L）

* Protein A纯化步骤均使用Toyopearl AF-rProtein A HC-650F。

※大量的样品进行上样（100 mg/mL充塡剤）、用盐浓度为0.26 mol/L 的NaCl进行洗脱。纯化结果，单体的回收率为83%，多聚体、HCP、脱落的Protein A配基等杂质均被有效地去除。

参考資料： Application Note; Increase monoclonal antibody purity with TOYOPEARL Sulfate-650F resin; Strong cation-exchange resin for capture and

removal of mAb Aggregates, Tosoh Bioscience LLC (2016).

l 使用Protein A填料的抗体纯化的层析工艺案例

*使用流穿模式（FT）的情况下，根据抗体的种类来优化填料的粒径以及缓冲液的盐浓度，一般来说推荐使用160mM以上的盐浓度。

Protein A填料 ： TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F

阳离子交换填料 ： TOYOPEARL Sulfate-650F, GigaCap S-650M, GigaCap CM-650M

： TOYOPEARL MX-Trp-650M（阳离子交换型混合模式填料）

阴离子交换填料 ： TOYOPEARL NH2-750F, GigaCap Q-650M, GigaCap DEAE-650M

疏水填料            ： TOYOPEARL Butyl-650/600M, Phenyl-650/600M, PPG-600M, Hexyl-650C

l TOYOPEARL Sulfate-650F产品参数

l TOYOPEARL NH2-750F填料以及筛选用预装柱产品一览表