![]() | |
实验方法 该实验采用的是经过优化的喜树碱诱导Jurkat细胞系凋亡实验条件。其他类型的细胞需做相应调整。该试剂盒在传统及Attune?声波聚焦流式细胞仪上验证过,使用Attune?声波聚焦流式细胞仪时,各种流速(25 μL/min 到 1,000 μL/min)都可以。 | |
| 1.用有效方法诱导凋亡;设一不加诱导的阴性对照。 2.孵育之后收集细胞并用冷的PBS洗涤。 3.制备1×annexin V 结合缓冲液:按10次分析的量计算,加1 mL试剂C到4ml的去离子水中。 4.制备100μg/mL的PI工作液:用45μl 1×annexin V 结合缓冲液稀释5μl试剂B,剩余可保存备用。 5.再次离心步骤2中收集的细胞,弃去上清,重悬在1×annexinV 结合缓冲液。计数并用上述缓冲液稀释至约1 × 106 cells/mL。按每次实验用量100μl准备充分。 6.在每100μl细胞悬液中加入5μl试剂A和1μl步骤4制备的PI工作液。 7. 室温孵育15min。 8. 孵育结束,加400μl 1×annexin V 结合缓冲液,轻轻混匀后置于冰上。 9.尽快对染色细胞进行分析。可用FL1检测530nm激发光,FL3检测>575nm的激发光。细胞群将被分为三组:活细胞显示弱荧光,凋亡细胞显示绿色荧光,而死细胞则同时发红、绿荧光。 10. 可用荧光显微镜验证结果,适用检测FITC、TRITC或Texas Red®的滤光片检测。 |
![]() | |
图1. Jurkat细胞经10μM喜树碱处理4h(B)或不处理(A)的流式图。细胞经喜树碱处理后,凋亡细胞增多。A=凋亡细胞;V=活细胞;N=坏死细胞。 |
阅读原文:http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2014120004.html
更多
赛默飞与苏州工业园区签署战略合作备忘录,投资设立赛默飞中国生命科学研发中心
厂商
2021.05.27
五一劳动节放假通知及服务保障
厂商
2024.05.11
分享两个小助手
厂商
2024.08.21
严把质量关!近20台百特仪器为产品质量保驾护航
厂商
2024.08.22