单个细胞或有限的样本进行高度均一的全基因组扩增

联科生物

2014/10/02 23:13

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您是否需要探索单细胞中的遗传信息？我们为您提供解决方案！使用QIAGEN专用于单细胞或少量细胞样本的分析试剂盒，即可了解单细胞基因组和转录组序列信息。创新的多重置换扩增（MDA）技术能够可靠扩增单细胞或少量样本中的全基因组或全转录组。

REPLI-g Single Cell Kit可均一的扩增单个细胞（1至1000个细菌或肿瘤细胞）或纯化的基因组DNA，能够覆盖基因组所有位点。所有缓冲液和试剂生产都经过严格控制的流程，避免污染DNA，确保每次实验获得可靠的结果。该产品采用多重置换扩增（MDA）技术，对所有基因组位点进行无偏差的扩增。与基于PCR的全基因组扩增技术相比，该技术具有更好的扩增高保真度，避免出现假阳性或假阴性信号。

原理

REPLI-g Single Cell Kit含有REPLI-g sc Polymerase，这是一种优化的新型高保真Phi 29聚合酶。该试剂盒采用多重置换扩增技术扩增复杂的基因组DNA，温和的碱孵育能够避免DNA片段化，促进对所有位点的无偏差扩增。该试剂盒十分适用于分离的肿瘤细胞或细菌细胞等单一细胞，能够扩增获得高产量DNA（参见表1）。此外，该试剂盒还配有专用于鲜血或干血、新鲜或冷冻组织的实验方案，可用于多种研究样本。常规DNA产量可达40 μg，对模板的起始量要求低，因此进行后续遗传分析时无需检测DNA浓度。REPLI-g Single Cell Kit的扩增产物平均长度超过10 kb，且覆盖所有位点，适合于多种应用，包括二代测序、基于芯片技术的比较基因组杂交、焦磷酸测序和real-time PCR分析（参见表2）。

表1. 样本类型和研究领域

样本类型（细胞/DNA）研究领域人类/动物生物标记物研究（SNP、突变、CNV）干细胞研究循环胚胎细胞分析嵌合体研究遗传易感性研究转基因动物基因分型癌症体细胞遗传变异分析肿瘤恶化肿瘤干细胞/进化循环肿瘤细胞分析细菌宏观基因组学研究病原体分析微生物基因分型 Plants* 植物气孔研究花粉分析 * 没有细胞壁的细胞或纯化的基因组DNA。

表2. 下游应用和仪器

应用仪器全基因组测序二代测序平台? 外显子组测序 SNP基因分型芯片芯片平台? Array CGH qPCR/PCR技术 Real-time PCR/PCR仪? Sanger测序毛细管测序仪? 焦磷酸测序 PyroMark (QIAGEN) ? 多家供应商均有销售

表3. REPLI-g Single Cell Kit的成

试剂盒成分优势 REPLI-g sc Polymerase 最长可达70 kb的长片段保真性是Taq聚合酶的1000倍覆盖所有位点均一扩增所有位点 REPLI-g sc Reaction Buffer? 对所有位点进行无偏差的扩增 Buffer DLB （裂解和变性）高效扩增不损伤DNA 紫外线照射去除污染减少可检测到的残留DNA污染 ? 含有盐、引物和dNTP

表 4. 多种REPLI-g Kits的规格

产品名称 REPLI-g Single Cell REPLI-g Mini REPLI-g UltraFast Mini REPLI-g Midi REPLI-g Screening REPLI-g FFPE REPLI-g Mitochondrial DNA 产品货号 150343/ 150345 150023/ 150025 150033/ 150035 150043/ 150045 150126 150243/ 150245 151023 起始材料单一细胞、gDNA 纯化的基因组DNA、血液、细胞纯化的基因组DNA、血液、细胞 FFPE组织、FFPE组织中纯化的基因组DNA 纯化的基因组DNA 另外提供其他起始材料的实验方案起始量单一细胞、2–1000各细胞、组织、纯化的gDNA （1–10 ng） >10 ng gDNA、0.5 μl血液或细胞（>600个细胞/μl） >10 ng gDNA、0.5 μl血液或细胞（>600个细胞/μl）组织切片（直径1 cm，厚度10–40 μm）；>100 ng gDNA >1 ng纯化的gDNA 产量（μg/反应） 40 10 7–10 40 8 标准产量：≤10; 高产量：≤40 3–5 反应时间 8–16小时 10–16 小时 1.5小时 8–16小时 12–16小时标准产量：4小时；高产量：10小时 8小时手动操作时间 15分钟 15分钟 15分钟 15分钟 15分钟 40分钟 15分钟规格反应管反应管反应管反应管孔板

以上信息来源QIAGEN

http://www.qiagen.com/cn/products/catalog/sample-technologies/dna-sample-technologies/genomic-dna/repli-g-single-cell-kit/#productdetails

阅读原文：http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014100002.html

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