猪脑心肌炎病毒抗体(EMCV-Ab)试剂盒定性实验方法

猪脑心肌炎病毒抗体(EMCV-Ab)试剂盒定性实验方法 操作步骤： 1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀， 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4.配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。 结果判定： 试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定：样品OD 值< 临界值（CUT OFF）者为猪脑心肌炎病毒抗体(EMCV-Ab)阴性 阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为猪脑心肌炎病毒抗体(EMCV-Ab)阳性 注意事项 1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5．底物请避光保存。 6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm 7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须注意安全。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月