小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒操作步骤

小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒操作步骤 操作步骤： 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为240pg/ml，160pg/ml ，80pg/ml L，40pg/ml ， 20pg/ml）。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450n波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。 ELISA 试剂盒组成： 试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存 说明书1 份1 份 封板膜2 片（48） 2 片（96） 密封袋1 个1 个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：360pg/ml 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存 标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存 酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存 样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存 显色剂A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存 显色剂B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存 终止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存 浓缩洗涤液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶2-8℃保存 检测范围： 5pg/ml - 300pg/ml 保存条件及有效期： 1.试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月 试剂盒性能： 1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.95 以上。 2.批内与批间应分别小于9%和11%