葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)操作说明

葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)操作说明 产品组成： 试剂(A): G-6-Pase 孵育液 50ml 4℃ 避光 试剂(B): ALP 硫化溶液 2×1ml RT 避光 试剂(C): 中性福尔马林 50ml 4℃ 避光 试剂(D): G-6-Pase 对照液 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1 份 产品简介： 葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6 –phosphatase，G-6-Pase)是一种多存在于哺乳类动物肝、肾、肠等组织的膜结合酶，G-6-Pase 和微体紧密结合，定位于内质网，是内质网的主要标志酶，能把葡萄糖-6-磷酸水解成葡萄糖和磷酸。G-6-Pase 对维持血糖浓度的相对恒定有至关重要的作用，是糖代谢的关键酶。当血糖降低时，G-6-Pase 促进肝糖原转变为血糖。当缺乏G-6-Pase 时，会引起糖原分解障碍，使糖原积累在肝、肾、心脏等部位，导致肝糖原储积病。G-6-Pase 最适pH 为6.5，在pH6.0～8.0 亦可，pH8.0 最稳定，pH5.0易变性。组织化学反应多用pH6.5～6.7。 葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)采用重金属捕捉剂和磷酸结合显示酶的活性。该酶对固定很敏感，组织经80%乙酸溶液固定后用石蜡包埋，G-6-Pase 完全被抑制。需用新鲜组织低温恒冷切片，经甲醛短时固定酶即失活，但可短时低温丙酮固定，但一般不固定。 操作步骤(仅供参考)： 1、冰冻切片入蒸馏水清洗。 2、入G-6-Pase 孵育液，37℃孵育15～20min。 3、自来水冲洗后，蒸馏水冲洗。 4、在上述过程中配制ALP 硫化工作液，即取试剂(B)用蒸馏水稀释50 倍, 即为ALP 硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1min。 5、自来水水洗3～5min。 6、(可选)入中性福尔马林，固定2min。 7、入蒸馏水水洗2 次。 8、甘油明胶封片