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当前位置： 青岛海博生物 > 最新动态 > PCR技术

PCR技术

青岛海博生物

2022/06/09 14:53

阅读：31

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PCR: Polymerase chain reaction，即聚合酶链反应。是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。

PCR技术的发展历史：

  1985年关于PCR 的文章首次由美国科学家Kary Mullis等人在 《Science》杂志上发表 。

  1989年《Science》杂志报道了耐热性DNA多聚酶 Taq酶（生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到的一种耐热的DNA聚合酶 ）的发现,预示着分子时代的到来。12月《Science》杂志将PCR和它所使用的聚合酶命名为第一个“年度分子”。

1993年Kary Mullis 因PCR的发明获得诺贝尔化学奖。


PCR技术的原理：

  遗传物质由细胞核、染色体、DNA（脱氧核糖核酸和磷酸链和碱基构成)、碱基（A、T、C、G）是按双链螺旋排列的，碱基序列的长度和排列的顺序决定了生物的多样性。比如人类体细胞中共有31亿个碱基对，按上述的0.1%的差，人和人之间有3百万个碱基对的差别。 

  PCR的基本工作原理就是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机理沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成。

  PCR反应的基本成分包括7种基本成分：模板DNA、特异性引物、热稳定DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸（dNTP）、二价阳离子、缓冲液及一价阳离子。基本反应步骤 ：变性--退火--延伸。最后通过染料如EB染色DNA后在紫外灯下显色检出。


PCR技术的注意事项：

1、防止污染，建立良好的质量控制。操作时避免气溶胶产生，特别注意阳性样品的拿放，使用一次性耗材，穿戴手套并经常更换，永远在最后一步才加核酸，液体分装使用等。

2、引物设计合理。

3、Taq酶扩增错误率较高，大约1/100对碱基/20个循环。

4、镁离子浓度对反应效率的影响。

5、仪器稳定性，升降温速率，管子的密合度等。

6、RT-PCR注意防止RNA降解。

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