大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试验原理：大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（elisa）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的hrp。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物a、b，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试剂盒内容及其配制 大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒自备材料1）蒸馏水。2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3）振荡器及磁力搅拌器等。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒安全性1）避免直接接触终止液和底物a、b。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒操作注意事项1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物a、b液时，避免使用带金属部分的加样器。5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7）底物a应挥发，避免长时间打开盖子。底物b对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取od值。8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒样品收集、处理及保存方法1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2）血浆-----edta、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试剂的准备1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒操作步骤1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5）每孔加入80ul的亲和链酶素-hrp，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7）每孔加入底物a、b各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9）在450nm波长处测定各孔的od值。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数r值为0.990。2. 特异性：不与其它细胞因子反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的od值2、以吸光度od值为纵坐标（y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（x），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其od值由标准曲线换算出相应的浓度。

大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试验原理：大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（elisa）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的hrp。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物a、b，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试剂盒内容及其配制 大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒自备材料1）蒸馏水。2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3）振荡器及磁力搅拌器等。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒安全性1）避免直接接触终止液和底物a、b。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒操作注意事项1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物a、b液时，避免使用带金属部分的加样器。5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7）底物a应挥发，避免长时间打开盖子。底物b对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取od值。8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒样品收集、处理及保存方法1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2）血浆-----edta、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试剂的准备1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒操作步骤1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5）每孔加入80ul的亲和链酶素-hrp，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7）每孔加入底物a、b各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9）在450nm波长处测定各孔的od值。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数r值为0.990。2. 特异性：不与其它细胞因子反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(mip-1α/ccl3)elisa检测试剂盒结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的od值2、以吸光度od值为纵坐标（y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（x），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其od值由标准曲线换算出相应的浓度。

三光气    32315-10-9    硫化钠    1313-84-4    无水亚硫酸钠    7757-83-7    干络素    9001-71-9    2-溴吡啶    109-04-6    十六烷基胺    143-27-1    三氯化铁    7705-08-0    氯化锌    7646-85-7    吐温20     9005-64-5    2,6-二氨基吡啶    141-86-6    盐酸羟胺    5470-11-1    氯化钴，六水     7791-13-1    1,2-丙二醇    57-55-6    铟粉    7440-74-6    氨基磺酸铵    7773-06-0    D-甘露糖    3458-28-4    乙醇钠    141-52-6    鼠李糖    6155-35-7    钙试剂羧酸钠    3737-95-9    噻吩    110-02-1        乙酸镉二水合物    CAS号:5743-04-4    硫脲    62-56-6    氟硅酸钠    16893-85-9    无水硫酸镁    7487-88-9    乙酸铅    6080-56-4    羧甲基纤维素钠    9004-32-4    氯化铅    7758-95-4    乙二胺四乙酸    60-00-4      邻苯二甲酸氢钾    877-24-7    溴化铯    7787-69-1    硝酸铯    7789-18-6    乙酸铯/醋酸铯    3396-11-0    四硼酸钠,十水    1303-96-4    结晶氧化铝    1344-28-1    硝酸铜，三水    10031-43-3    酒石酸钠    6106-24-7    氯化铜,二水    10125-13-0    氟化钠    7681-49-4    乙酸锰,四水    6156-78-1    酒石酸钾钠，四水    6381-59-5    无水碳酸钠    497-19-8    氯化铵    12125-02-9    硫酸铬钾    7788-99-0    溴化钾    cas:7758-02-3    氯化亚铁,四水    13478-10-9    碱式乙酸铅    1335-32-6    铬酸钠,四水    10034-82-9    溴酸钾    CAS:7758-01-2    抗坏血酸    50-81-7    羟甲基纤维素    9000-11-7    白凡士林    CAS:8009-03-8    香草醛    121-33-5    氢氧化钠    1310-73-2;8012-01-9    甲醛次硫酸钠    149-44-0    1,1'-双二苯基膦二茂铁氯化镍    67292-34-6    硫代乙醇酸钠    367-51-1    秦皮甲素    531-75-9    牛血清白蛋白    9048-46-8    金属镓    7440-55-3    甲基红    493-52-7 4-（二甲氨基）苯甲醛    100-10-7    酚红    143-74-8    2-碘苯甲醚    529-28-2    碘苯    591-50-4    三甲基氯硅烷    75-77-4    四氢吡咯    123-75-1    溴代乙酸乙酯    105-36-2    对甲基苯甲醛    104-87-0    1，2-环己二胺,顺反异构体混合物    694-83-7    1,2-乙二硫醇    540-63-6    丙烯酰氯    814-68-6    2-吡啶-甲醛    1121-60-4    吡啶-3-甲醛    500-22-1    甲基丙烯酸羟乙酯     868-77-9    草酰氯    79-37-8    OP-10    9002-93-1    亚磷酸二乙酯    CAS：762-04-9    正壬醇    CAS号:143-08-8    N-甲基单乙醇胺    CAS号:109-83-1    HDI/六亚甲基二异氰酸酯    822-06-0        

人组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。人组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：人组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA试剂盒计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10．如与英文说明书有异，以英文说明书为准。人组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA试剂盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃。2．有效期：6 个月

人组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。人组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：人组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA试剂盒计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10．如与英文说明书有异，以英文说明书为准。人组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA试剂盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃。2．有效期：6 个月

无水氯化钙 10043-52-4烯丙基磺酸钠 2495-39-8孔雀绿 569-64-2柠檬酸镁 153531-96-5乙酰丙酮镉   14689-45-3乙酰丙酮锰Ⅱ 14024-58-9乙酰丙酮锰Ⅲ   14284-89-0乙酰丙酮铁     14024-18-1乙酰丙酮镍 3264-82-2酞菁钴 3317-67-7甲基苯骈三氮唑 29385-43-1对溴苯乙酮 99-90-1吲哚 120-72-9硼粉 7440-42-8叶酸 59-30-3氟化钾 7789-23-3泊洛少姆P188 9003-11-6琼脂糖 9012-36-61,3-二甲基-5-吡唑酮 2749-59-9对氨基苯甲酸乙酯(苯佐卡因) CAS:94-09-7藻红B 15905-32-5藻红B 15905-32-5葡萄糖酸锌 CAS:4468-02-4对苯乙烯磺酸钠 2695-37-6二硫苏糖醇(DTT) 3483-12-3金属镱 7440-64-4地蒽酚 1143-38-0藏红T 477-73-6铜试剂 20624-25-3钛铁试剂 149-45-1茜素络合指示剂 3952-78-1磷酸氢二钠，十二水 10039-32-4二溴海因 77-48-54-硝基苄醇(对硝基苯甲醇) 619-73-85-甲基苯骈三氮唑(5M-BTA) 136-85-6聚乳酸 26100-51-64,4'-偶氮(4-氰基戊酸) 2638-94-0橙黄G 1936-15-8偏钒酸铵 7803-55-6碳酰肼 497-18-7对溴苯甲醛 1122-91-4偏钒酸钠 13718-26-8纳迪克酸酐 129-64-6丁二酸酐 108-30-5丁二酰亚胺 123-56-8泊洛少姆P407 9003-11-6D-半乳糖 59-23-4卡巴匹林钙 5749-67-7苯并三氮唑 95-14-71,3-丙磺酸内酯 1120-71-4过硫酸氢钾 70693-62-8降冰片烯二酸酐 129-64-6邻碘苯甲酸 88-67-5氨基硫脲 79-19-6硫代米氏酮 1226-46-6氯乙烯基镁 3536-96-7正丁基锂己烷溶液 1.6M(15%溶液）109-72-8 正丁基锂己烷溶液 2.2M(20%溶液）109-72-8 甲基氯化镁 3M THF溶液 676-58-4苊 83-32-9芴 86-73-7L?(+)-α-苯甘氨酸 2935-35-51,2-乙二硫醇 540-63-6山奈酚 520-18-3锌粒 7440-66-6氯金酸 16903-35-81,3-二苯基异苯并呋喃 5471-63-63,3′,5,5′-四甲基联苯胺 54827-17-71,5-二氟-2,4-二硝基苯 327-92-4三溴化硼 10294-33-4玻璃酸钠 9067-32-7二硫化铁 1309-36-0青藤碱 115-53-7甘氨酸 56-40-6N-氯代丁二酰亚胺 128-09-6考马斯亮蓝G250 6104-58-11,8,9-三羟基蒽 1143-38-0钯炭 64741-65-7钯炭 64741-65-7碲粒 13494-80-9络黑T 1787-61-7对溴苯酚 106-41-2硒粉 7782-49-21,3-环己二酮 504-02-9γ-氨基丁酸 CAS:56-12-22-氨基苯并咪唑 934-32-71,2,4-三氮唑 288-88-02，2-双（羟甲基）丙酸 Cas:4767-03-7硫酸镍 7786-81-4;15244-37-8;15905-81-4氟钛酸铵 16962-40-6木糖醇 87-99-0;16277-71-7甲酚红 1733-12-6缩二脲 108-19-0L-丙氨酸 56-41-7乙酰丙酮铜 13395-16-9聚四氟乙烯微粉 9002-84-0双硫脲 142-46-1β-内酰胺酶 9073-60-3二氧化碲/TeO2 CAS:7446-07-3高纯硫/S 7704-34-9N，N-二甲基甲酰胺 CAS:68-12-2D-山梨醇/山梨糖醇/Sorbitol 50-70-4七氟丁酸 375-22-4聚（甲基丙烯酸甲酯）（PMMA) 9011-14-7分子筛3A 308080-99-1

4-（二甲氨基）苯甲醛 100-10-7酚红 143-74-82-碘苯甲醚 529-28-2碘苯 591-50-4三甲基氯硅烷 75-77-4四氢吡咯 123-75-1溴代乙酸乙酯 105-36-2对甲基苯甲醛 104-87-01，2-环己二胺,顺反异构体混合物 694-83-71,2-乙二硫醇 540-63-6丙烯酰氯 814-68-62-吡啶-甲醛 1121-60-4吡啶-3-甲醛 500-22-1甲基丙烯酸羟乙酯 868-77-9草酰氯 79-37-8OP-10 9002-93-1亚磷酸二乙酯 CAS：762-04-9正壬醇 CAS号:143-08-8N-甲基单乙醇胺 CAS号:109-83-12-碘吡啶 5029-67-4乙基环己烷 1678-91-7正辛胺 111-86-4溴代丙炔 106-96-7N,N-二甲基乙醇胺 108-01-0异佛尔酮二异氰酸酯 4098-71-9过氧乙酸消毒剂 79-21-0单油酸甘油酯 25496-72-4四氢呋喃硼烷络合物 14044-65-6茚 95-13-6三氟乙酸 453-20-3y-丁内酯 96-40-8丙烯酸二甲基氨基乙酯 2439-35-2焦碳酸二乙脂(DEPC) 1609-47-8甲基丙烯酸缩水甘油酯 106-91-2溴代十二烷 143-15-72-十一酮 112-12-9司盘85/司班85/山油酸山梨醇酯 26266-58-0四甘醇/三缩四乙二醇 112-60-7对氯苯乙酮 99-91-2对氯苯甲醛 104-88-1氯化铋 7787-60-2镱块 7440-64-4偏钒酸钠 13718-26-8对溴苯甲醚 104-92-7诺氟沙星 70458-96-7对甲氨基苯酚硫酸盐(米吐尔) 55-55-04-氨基苯酚(对氨基酚) 123-30-8氯化钠 7647-14-5丙二酸二乙酯 105-53-3正丙醇锆 23519-77-9苯乙炔 536-74-3碘化银 7783-96-2硼酸三异丙酯 5419-55-6二月桂酸二丁基锡 77-58-7三氟化硼乙醚 109-63-7马尿酸钠 532-94-5聚四氟乙烯微粉 9002-84-0大豆油 8001-22-7铜片 7440-50-836%乙酸 64-19-7N-甲基吡咯烷酮 872-50-4甲醛 50-00-0水合肼 一水合物 7803-57-8水合肼 一水合物 7803-57-8钛酸四丁酯 5593-70-41,1,2三氯乙烷 79-00-51,1,1三氯乙烷 71-55-6L-缬氨酸 72-18-4锌粉/Zn 7440-66-6雷尼镍 7440-02-0乙酸己酯 142-92-7甲酸异戊酯 110-45-2大孔吸附树脂D101 CAS:9060-05-3镍铝合金 12635-29-9

主要用途 YIJI植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氢溴化乙啶，在细胞氧化条件下，产生红色荧光，来检测细胞内超氧阴离子活性氧族的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种其适用于新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，滞留持久，荧光清晰。 技术背景 超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。二氢溴化乙啶（Dihydroethidium bromide；Hydroethidine；DHE）是一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不外漏的染色剂。一旦被超氧自由基阴离子氧化，二氢溴化乙啶转化为溴化乙啶，进入细胞核，与DNA紧密结合，便产生荧光。据此证明细胞内超氧阴离子活性氧族的存在。 产品内容 YIJI清理液（Reagent A）        毫升YIJI固着液（Reagent B）        毫升YIJI离析液（Reagent C）        毫升YIJI染色液（Reagent D）        微升产品说明书           1份 保存方式 保存YIJI染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI固着液（Reagent B）和YIJI离析液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月 用户自备 胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基15毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器1.5毫升离心管：用于染色液配制的容器载玻片：用于组织染色操作解剖针：用于植物组织解剖血细胞计数仪：用于细胞计数（微型）台式离心机：用于样品处理培养箱：用于染色孵育比色皿或酶标板：用于荧光定量分析的容器（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光分析细胞流式仪：用于用于细胞染色分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析 实验步骤 方法一：活体组织染色 1． 加上xx微升YIJI清理液（Reagent A）在载玻片上2． 切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）中3． 用解剖针小心压碎根尖4． 小心移去YIJI清理液（Reagent A）5． 小心加上xx毫升YIJI清理液（Reagent A）在根尖上6． 再加上xx微升YIJI染色液（Reagent D） 7． 放进37℃培养箱里孵育20分钟8． 取出载玻片，移去染色液9． 小心加上xx毫升YIJI清理液（Reagent A）10． 小心移去YIJI清理液（Reagent A）11． 盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压12． 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高 方法二：组织固定染色 1． 加上xx微升YIJI清理液（Reagent A）在载玻片上2． 切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的YIJI清理液（Reagent A）中3． 用解剖针小心压碎根尖4． 小心移去YIJI清理液（Reagent A）5． 小心加上xx毫升YIJI固着液（Reagent B）6． 室温下，孵育3小时，避免干化7． 小心移去YIJI固着液（Reagent B）8． 小心加上xx毫升YIJI清理液（Reagent A）9． 小心移去YIJI清理液（Reagent A）10． 小心加上xx毫升YIJI离析液（Reagent C）11． 室温下孵育5分钟12． 小心移去YIJI离析液（Reagent C）13． 小心加上xx毫升YIJI清理液（Reagent A）14． 小心移去YIJI清理液（Reagent A）13． 小心加上xx毫升YIJI清理液（Reagent A）在根尖上14． 再加上xx微升YIJI染色液（Reagent D） 15． 放进37℃培养箱里孵育20分钟16． 取出载玻片，移去染色液17． 小心加上xx毫升YIJI清理液（Reagent A）18． 小心移去YIJI清理液（Reagent A）19． 盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压20． 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高 方法三、培养植物细胞脱离染色 1． 准备1瓶625px2细胞培养瓶的待测细胞2． 小心抽去细胞培养液3． 加入xx毫升 YIJI清理液（Reagent A）到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面4． 小心抽去YIJI清理液（Reagent A）5． 加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6． 置入37℃培养箱1分种7． 振动培养瓶，使细胞脱落8． 加入4毫升用户自备的完全细胞培养液9． 移入15毫升锥形离心管，充分混匀（注意：悬浮细胞直接从这一步骤开始）10． 移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数11． 移出1 X 106细胞到新的15毫升锥形离心管12． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g13． 小心抽去上清液14． 加入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）15． 再加入xx微升YIJI染色液（Reagent D），混匀16． 放进37℃恒温水槽孵育20分钟，避免光照17． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g18． 小心抽去上清液19． 加入预冷的xx微升YIJI清理液（Reagent A），轻柔混匀细胞颗粒群20． 放进冰槽里21． 选择下列方式之一进行操作：1) 即刻进行细胞流式仪分析：藻红蛋白（phycoerythrin；PE）波段，观察50000个细胞以上――波峰右移，表明超氧阴离子含量高 2) 或使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高 3) 或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：1）移取400微升上述细胞悬液到1毫升比色皿2）加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）3）上下倾倒混匀数次4）放进荧光分光光度仪：激发波长540nm，散发波长590nm――RFU增高，表明超氧阴离子含量高 方法四、贴壁培养细胞染色 1． 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项4）2． 小心抽去细胞培养液3． 小心沿着孔壁加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面4． 再加入xx微升YIJI染色液（Reagent D）5． 放进37℃细胞培养箱里孵育20分钟6． 小心抽去染色液 7． 小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的YIJI清理液（Reagent A）到细胞培养孔8． 选择下列方式之一进行操作：（A）使用倒置荧光显微镜观察（定性检测）：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高 （B） 使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长540nm，散发波长590nm――RFU增高，表明超氧阴离子含量高 注意事项 1． 本产品为20次操作2． 操作时，须戴手套3． YIJI固着液（Reagent B）和YIJI离析液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全4． 孵育时，必须避免光照5． 建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析6． 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量：操作容器   操作用量   载玻片   100微升   载玻片培养皿   1毫升   35mm培养皿   1毫升   96孔培养板   100微升   48孔培养板   200微升   24孔培养板   500微升   12孔培养板   1毫升   6孔培养板   2毫升   625px2细胞培养瓶   3毫升    7． 本产品适合活体染色和固定染色，染色剂不易洗掉，染色持久8． 根据不同组织类型，调整YIJI染色液（Reagent D）的使用剂量（1：100至1：1000容量比），避免过度染色9． 本公司提供系列活性氧分析试剂产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定2． 本产品经鉴定荧光清晰

主要用途 YIJI线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚，通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。 技术背景 线粒体呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（Succinate-Coenzyme Q Reductase；Succinate Dehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide；FAD）和三个铁硫中心（Fe-S clusters），以及细胞色素b亚单位，其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma）和Leigh综合征。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸－辅酶Q还原酶的催化，氧化为富马酸，同时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH2），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm 波长），由此定量测定琥珀酸－辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是： 产品内容 YIJI缓冲液（Reagent A）          毫升YIJI反应液（Reagent B）          毫升YIJI阴性液（Reagent C）           毫升YIJI底物液（Reagent D）         微升产品说明书              1份 保存方式 保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；YIJI反应液（Reagent B）和YIJI底物液（Reagent D），避免光照，有效保证6月 用户自备 比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析培养箱：用于孵育反应物 实验步骤 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；YIJI缓冲液（Reagent A）室温预热；YIJI反应液（Reagent B）和YIJI底物液（Reagent D）注意避光。然后进行下列操作。 一、 测定准备 1． 准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里 2． 设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零 二、 背景对照测定 1． 移取xx微升YIJI缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2． 加入xx微升YIJI反应液（Reagent B）3． 加入xx微升YIJI底物液（Reagent D）4． 上下倾倒数次，混匀5． 放进30℃培养箱里静置3分钟6． 加入xx微升YIJI阴性液（Reagent C）7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）8． 即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟  三、 样品活性测定 1． 移取xx微升YIJI缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2． 加入xx微升YIJI反应液（Reagent B）3． 加入xx微升YIJI底物液（Reagent D）4． 上下倾倒数次，混匀5． 放进30℃培养箱里静置3分钟6． 加入100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）8． 即刻放入分光光度仪检测，此为样品活性读数：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或5分钟 四、 计算样品活性 注意事项 1． 本产品为21次操作，包括背景对照2． 操作时，须戴手套3． YIJI反应液（Reagent B）含有毒性物质，避免直接用手接触4． 系统操作过程中，背景测定只需1次5． 线粒体样品检测前，须溶解；建议冻存融解（－70℃至37℃）循环3次6． 如果增强酶活检测，建议使用YIJI线粒体复合物待测样品预处理试剂盒－GMS103427． 加入样品启动反应后3秒内即刻比色测定8． 96孔板测定初始读数（0分钟读数）0.5左右为理想状态；比色皿测定为1.0左右9． 反应1分钟后比色测定值趋于稳定；测定值由高到低变化；测定可以持续5分钟10． 测定值由高到低变化，即5分钟测定读数低于0分钟测定读数，表明有酶活性11． 比色测定后，比色皿须清洗彻底12． 建议待测样本线粒体蛋白浓度为10微克/100微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供YIJI线粒体溶解试剂盒GMS10018为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和YIJI Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1）13． 如果使用细胞或组织裂解悬液，则蛋白浓度为50微克/100微升14． 线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸－辅酶Q还原酶）单位活性定义为：在30℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够还原1微摩尔合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚（DCPIP）所需的酶量作为一个活性单位15． 本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品  质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定2． 本产品经鉴定检测准确

     YIJI 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途YIJI 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在组织氧化损伤条件下，产生荧光，来定量检测冰冻组织内活性氧族的存在状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适宜于冰冻动物组织的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。产品内容YIJI 清理液（Reagent A）YIJI 染色液（Reagent B）YIJI 稀释液（Reagent C）产品说明书毫升微升毫升1份保存方式保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 12 月用户自备1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器培养箱：用于染色孵育荧光显微镜：用于观察荧光组织实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI 稀释液（Reagent C）置于室温预热。然后移出微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新的 1.5 毫升离心管，1 加入微升 YIJI 稀释液（Reagent C），混匀后，标记为 YIJI 染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。1． 准备 5 片待测的厚为 10 微米的未经固着处理的冰冻切片2． 置于室温下，小心加上4． 小心加上微升预冷的 YIJI 清理液（Reagent A），铺满整个切片表面3． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）微升室温预热的 YIJI 染色工作液，铺满整个切片表面5． 在 37℃湿润培养箱里，孵育 20 分钟（注意：避免液体蒸发）6． 小心移去切片上的 YIJI 染色工作液，避免光照7． 小心加上微升 YIJI 清理液（Reagent A），铺满整个切片表面8． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）9． 放上盖玻片或封片10．即刻在荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长 490nm，散发波长 530nm――荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高注意事项1． 本产品为 50 次操作2． 所有操作均须无菌状态下进行3． 建议使用新鲜组织（手术切除后 1 小时内）制成的冰冻切片4． 操作时，须戴手套5． YIJI 染色工作液避免光照6． 孵育时，须避免光照7． 建议组织染色完成后，即刻进行荧光定性分析8． 本公司提供阳性对照甲萘醌溶液，观察组织荧光增强现象9． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品质量标准1． 本产品经鉴定性能稳定2． 本产品经鉴定荧光清晰 2联系我们关于订购详情或技术支持，欢迎来电、来函、传真或电邮――    上海一基实业有限公司           上海市浦东新区张杨北路5972号邮编：200137订购电话：021-60548336传真：021-58610291主页：www.yijisy.com

  YIJI 线粒体呼吸链复合物 V 活性光谱法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途YIJI 线粒体呼吸链复合物 V（F0F1-ATP 酶/ATP 合成酶）活性光谱法定量检测试剂是一种旨在使用丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定与 ATP 合成对应的 ATP 水解产生 ADP 过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光谱法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的 F0F1-ATP 酶/ATP 合成酶的特异性活性检测。可用于心肌、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景线粒体呼吸链复合物V，通常称为ATP合成酶（ATP synthase） F型ATP酶 type ATPase）、（F和F1F0 ATP酶（F1F0ATPase），是线粒体氧化磷酸化的终极反应。其分子量为500KD，含有十六个亚单位，其中两个：ATP酶6和8为线粒体DNA编码的。ATP酶主要有两个结构域：F0为质子通道，由几个膜蛋白构成，包括a、b、c、d、e、F6、A6L、OSCP（oligomycin sensitive conferring protein）等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。复合物V的主要功能在于产生大部分细胞所需的能量ATP。ATP的合成需要线粒体内膜电子传递到氧分子时，呼吸链蛋白所产生的质子梯度变化。质子通过F0结构域传递到基质，激活F1催化活性结构域，促使ATP合成。该酶异常会导致心肌和神经系统疾病。基于ATP，在寡霉素参与下，受到F1F0 ATP酶的水解，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamideadenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm），来定量分析F1F0 ATP酶活性。其反应系统为：产品内容YIJI 缓冲液（Reagent A）YIJI 反应液（Reagent B）YIJI 阴性液（Reagent C）YIJI 底物液（Reagent D）YIJI 专性液（Reagent E）产品说明书毫升毫升毫升微升微升1份保存方式保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；YIJI 反应液（Reagent B），避免光照，有效保证 6 月用户自备比色皿：用于光谱分析的容器1 分光光度仪：用于光谱分析培养箱：用于孵育反应物实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；YIJI 反应液（Reagent B）注意避光。然后进行下列操作。一、 测定准备1． 准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里（注意：检测前溶解线粒体；参见注意事项 4）2． 设定好分光光度仪（温度为 30℃）：波长为 340nm，间隔 30 秒，读数 11 次（共 5 分钟），并置零二、 背景对照测定1． 移取 xx 微升 YIJI 缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2． 加入 xx 微升 YIJI 反应液（Reagent B）3． 加入 xx 微升 YIJI 底物液（Reagent D）4． 放进 30℃培养箱里孵育 3 分钟5． 加入 xx 微升 YIJI 阴性液（Reagent C）6． 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）7． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：340 波长读数 0 分钟 －340 波长读数 1 分钟或 5 分钟三、 样品总活性测定1． 移取 xx 微升 YIJI 缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2． 加入 xx 微升 YIJI 反应液（Reagent B）3． 加入 xx 微升 YIJI 底物液（Reagent D）4． 放进 30℃培养箱里孵育 3 分钟5． 加入 100 微升待测样品（注意：10 微克总线粒体蛋白；样品须溶解；参见注意事项 4）6． 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：340 波长读数 0 分钟 －340 波长读数 1 分钟或 5 分钟四、 样品非特异活性测定实验开始前，移取 100 微升待测样品（注意：10 微克总线粒体蛋白；样品须溶解；参见注意事项 4）到 1.5毫升离心管，加入 xx 微升 YIJI 专性液（Reagent E），混匀后，放进 30℃培养箱里孵育 15 分钟。然后置于冰槽里备用1． 移取 xx 微升 YIJI 缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2． 加入 xx 微升 YIJI 反应液（Reagent B）3． 加入 xx 微升 YIJI 底物液（Reagent D）4． 放进 30℃培养箱里孵育 3 分钟2 5． 加入 120 微升上述预处理的待测样品6． 上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：340 波长读数 0 分钟 －340 波长读数 1 分钟或 5 分钟五、 计算样品活性1）样品活性（总活性和非特异活性）【（样品读数－背景读数）X 1（体系容量；毫升）X 样品稀释倍数】÷【0xx（样品容量；毫升）Xxx（毫摩尔吸光系数 X 1 或 5（反应时间，分钟）】＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔 NADH/分钟2）样品特异活性样品总活性测定－样品非特异活性测定＝样品特异活性注意事项1． 本产品为 21 次操作（10 个样本），包括 1 次背景对照2． 操作时，须戴手套3． 系统操作过程中，背景测定只需 1 次4． 线粒体样品检测前，须溶解；建议超声处理（20 秒 X 3 循环；50％功率）或冻存融解（－70℃至 37℃）循环 3 次或使用 YIJI 线粒体溶解试剂盒－GMS100185． 建议线粒体悬液使用 0.25 M SUCROSE 和 2 mM EDTA，pH9.0；忌用磷酸缓冲溶液6． 建议使用线粒体裂解悬液，而不是细胞裂解悬液。如果使用细胞裂解悬液，第一须澄清；第二须加 50微克7． 加入样品后 3 秒内即刻光谱测定8． 反应 1 分钟后光谱测定值趋于稳定；测定值由高到低变化；测定可以持续 5 分钟9． 测定值由高到低变化，即 0 分钟测定读数高于 1 分钟或 5 分钟测定读数，表明有酶活性10．光谱测定后，比色皿须清洗彻底11．建议待测样本线粒体蛋白浓度为 10 微克/100 微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供 YIJI 线粒体溶解试剂盒 GMS10018 为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 YIJI Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 GMS30030.1）12．样品特异活性是指寡霉素敏感的 ATP 合成酶，去除其它干扰因素（例如复合物 I/II/III/IV 等）13．线粒体呼吸链复合物 V 酶活性单位浓度定义：在 30℃温度下，pH 7.5 条件下，每分钟内能够氧化 1 微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作为一个活性单位14．本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品质量标准1． 本产品经鉴定性能稳定2． 本产品经鉴定检测准确