冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

   YIJI 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙

酰乙酸盐，在组织氧化损伤条件下，产生荧光，来定量检测冰冻组织内活性氧族的存在状况的权威而经典

的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适宜于冰冻动物组织的分析。可以被用

于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，

性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基

（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷

氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）

次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等

细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光

乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过

氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。

产品内容

YIJI 清理液（Reagent A）

YIJI 染色液（Reagent B）

YIJI 稀释液（Reagent C）

产品说明书

毫升

微升

毫升

1份

保存方式

保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保

证 12 月

用户自备

1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器

培养箱：用于染色孵育

荧光显微镜：用于观察荧光组织

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI 稀释液

（Reagent C）置于室温预热。然后移出

微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新的 1.5 毫升离心管，

1

加入

微升 YIJI 稀释液（Reagent C），混匀后，标记为 YIJI 染色工作液，置入暗室里。然后进

行下列操作。

1． 准备 5 片待测的厚为 10 微米的未经固着处理的冰冻切片

2． 置于室温下，小心加上

4． 小心加上

微升预冷的 YIJI 清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

3． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）

微升室温预热的 YIJI 染色工作液，铺满整个切片表面

5． 在 37℃湿润培养箱里，孵育 20 分钟（注意：避免液体蒸发）

6． 小心移去切片上的 YIJI 染色工作液，避免光照

7． 小心加上

微升 YIJI 清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

8． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）

9． 放上盖玻片或封片

10．即刻在荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长 490nm，散发波长 530nm――荧光增强，表明活性氧

族（ROS）含量高

注意事项

1． 本产品为 50 次操作

2． 所有操作均须无菌状态下进行

3． 建议使用新鲜组织（手术切除后 1 小时内）制成的冰冻切片

4． 操作时，须戴手套

5． YIJI 染色工作液避免光照

6． 孵育时，须避免光照

7． 建议组织染色完成后，即刻进行荧光定性分析

8． 本公司提供阳性对照甲萘醌溶液，观察组织荧光增强现象

9． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

2

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