Adamas-life® ELISA试剂盒的优点
ELISA的操作技术要点
下文主要从样品的制备和保存、标准曲线绘制、加样、洗板和显色与终止五个方面来介绍双抗体夹心法ELISA操作技术要点。
01
样品的制备和保存
血清:将全血在室温下放置30分钟至1小时,不要剧烈摇晃以免溶血,待全血自然凝固,析出的淡黄色液体就是血清。制备时不能添加任何防腐剂或抗凝剂。可在全血凝固后低温低速离心10分钟来获取较多的血清。
血浆:在收集试管内先加入一定比例的抗凝剂(推荐EDTA),将血液加到一定量后轻轻颠倒摇动收集管以混匀血液。低温低速离心10分钟后得到的上清即为血浆。
吸取血清或血浆时要用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸,切记不要吸取细胞成分。若待测样品不能及时检测,样品制备后请分装,冻存于-20℃或-80℃,避免反复冻融。
02
标准曲线绘制
ELISA的标准曲线是标准品的浓度和OD值之间的函数关系。标准品曲线制作的准确操作和拟合回归方程的选择对样品中目标蛋白浓度推算十分重要。
小鼠IL-6标准曲线
03
加样
在双夹心ELISA检测中有3次加样步骤:加样、加标准品、加酶标抗体和底物。如果是生物素化抗体和辣根过氧化物酶标记的链霉素系统,则还需增加一次加样。
04
洗板
洗板过程非常重要,洗涤不充分会使背景值或阴性对照值偏高,洗涤步骤过于剧烈会使阳性对照值或吸光度偏低。洗板可以使用手动洗板或洗板机洗板。
手动洗板:要快速垂直甩尽酶标板中的液体,避免液体进入其他孔造成交叉污染,再在洁净的吸水纸上拍干。
洗板机洗板:需注意调节机器洗涤系统的压力,按说明书要求设置洗涤液加液体积和注入与吸出间隔时间。
05
显色与终止
显色底物在添加之前应是无色的,且始终处于避光状态。显色反应要避光进行,按说明书要求控制反应温度和反应时间。
显色反应示意图
ELISA操作有许多细节需要注意,本文如有未尽之处,欢迎大家在公众号回复补充。可以来【探索平台】订购优质高效的Adamas-life® ELISA试剂盒,祝大家每次实验都能取得满意的结果。
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