透析原理
透析是指溶质在浓度梯度的驱使下,通过半透膜选择性扩散,从而达到大/小分子分离,膜两侧浓度平衡。如果将样品置于透析膜管内,通过置换膜管外部的透析缓冲液,可将小颗粒物质清除,从而达到纯化大分子物质的目的。一般来说,一天之内置换3~5次缓冲液,然后在室温条件下,放在搅拌台上隔夜透析,即可达到高效的透析结果。
选择“正确的膜”
透析成功进行的关键是在适当的条件下选用最合适的膜,可根据以下6个步骤进行选择:
标准级与生物技术级对比
透析袋宽度选择
透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快,较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。简单来说,透析的样品越多,需要选择的透析袋宽度越大,反之亦然。透析袋直径和宽度的关系可参考下图:
透析袋分子量选择
透析膜微观下呈海绵状结构,代表膜孔径的截留分子量(MWCO)是一个间接衡量膜分离性能的参数。更准确的说,膜的截留分子量可定义为截留率至为少95%的溶质的分子量。
透析液选择
生物分子需在适当的pH范围内保存。一般的透析缓冲液pH范围为6~8。以下为常用的缓冲液:水、PBS、TBS、HEPES、氨基酸缓冲液。
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