CRISPR/Cas9作为最具开创性的工具之一,可以精确和高效地修改基因组序列来研究基因功能、疾病机制和治疗方法。当与iPSCs相结合时,CRISPR/Cas9通过促进iPSC基因组的精确编辑来创建疾病特异性遗传畸变模型,从而展现出非凡的力量,这对于研究疾病机制和开创新型治疗方法具有重要价值。此外,纠正iPSCs中的遗传异常使科学家能够生成针对特定免疫特征的定制细胞,为针对广泛疾病的个性化细胞治疗打开了可能性。
然而,尽管CRISPR技术在细胞工程中带来了巨大性的潜力,但仍存在与脱靶编辑和可变编辑效率相关的挑战。因此,为了识别具有所需特征的克隆细胞,分离克隆群体对编辑细胞的进一步表征至关重要。单克隆筛选,确保每个被研究的线都具有异质的基因组构成,同时保持一致的生物行为。
单细胞分离仪Hana和Pala助力基因编辑后筛选最佳克隆,越来越被顶尖科学家和研究人员所认可。Hana和Pala结合创新的微流体技术、流式细胞术和液体分配技术,可在几分钟内将单个细胞筛选并分离到96或384孔板中。低系统压力(<2psi)可确保轻柔分选,并保持细胞活力和完整性。
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01.
免疫系统对细胞疗法的排斥反应是细胞工程及细胞疗法开发过程中至关重要的一步。本研究揭示了低免疫的诱导多能干细胞(HIP)能在具备完全免疫能力的同种异体恒河猴体内长期存活,大大改善了受体的糖尿病。
在基因编辑恒河猴HIP细胞过程中,通过CRISPR基因失活创建B2M-/-CIITA-/- iPSCs,有效地防止异体的适应性免疫应答和先天性免疫激活。作者采用单细胞分离仪Hana来分选出编辑成功的HIP单个细胞,并成功培养成HIP单克隆。
02.
这项研究重新审视了腺苷酸单磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)在自噬中的作用,揭示了AMPK的双重功能:在能量不足时调节自噬的即时诱导,同时保留重要的自噬组分。这种双重角色对于在能量压力下维持细胞平衡和生存至关重要。
单细胞分离仪Hana在CRISPR编辑后创建各种敲除(KO)和双敲除(DKO)细胞系中发挥了关键作用。使用单细胞分离仪Hana分选GFP阳性细胞并进行单细胞克隆,建立了明确的克隆系。KO细胞系对于阐明被编辑的基因的功能起到了重要作用。
03.
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)影响全球20-25%的人口,这一数字随着肥胖的普遍增加而加剧,而治疗方案却很有限。利用CRISPR/Cas9工程,研究团队在HEK293T细胞系中使用荧光素酶报告基因标记了内源性血红素氧合酶-1(HMOX1)基因。然后单细胞分离仪Hana对经过编辑的细胞进行分选,建立单克隆体系。单克隆作为后续药物化合物筛选的基础模型。单细胞分离仪Hana在研究方法中发挥了关键作用。
04.
本文揭示了识别微管蛋白聚合抑制剂的一种新方法,利用内源性荧光标记β-微管蛋白和组蛋白H1的CRISPR - Hela细胞系来鉴定微管蛋白聚合抑制剂。使用β-微管蛋白(mCTover3)、组蛋白H1(mTagBFP2)和p62-SQSTM1(mRuby3)荧光蛋白, 用CRISPR和FAST-HDR载体系统开发HeLa细胞。
研究中采用单细胞分离仪Hana帮助作者快速、轻柔、高效地获得活性高的CRISPR - Hela单细胞,利于单克隆培养及扩增,为后续更多实验提供足够的细胞工具。
05.
该研究旨在通过削弱化疗耐药性来改善癌症治疗结果。采用CRISPR编辑引入能够使特定基因失效的突变。在实际应用中,研究团队使用了肺癌细胞系,编辑了NRF2基因并引入了两个突变。
通过两轮编辑和克隆以开发所需的细胞系,单细胞分离仪Hana高效地分配了单个细胞,简化了生成携带突变的肺癌细胞系的繁琐过程。
06.
骨质疏松症是一种普遍存在的与年龄相关的以骨密度降低为特征的骨骼疾病。尽管潜在的治疗方法BMP-2和CK2.3通过BMP信号通路起作用,受限于副作用及严格的使用限制。借鉴一个细胞系模型,该模型通过CRISPR-Cas9使BMPR1a受体(与BMP-2相关)敲除BMPRIa 基因,这项研究成功揭示了C57BL/6(B6)小鼠品系作为骨质疏松症研究的可靠模型。单细胞分离仪Hana将编辑后的细胞群进行分选,成为敲除细胞系的关键步骤,利于单克隆的后续培养和扩增。
07.
本文章主要研究HIV-1在人类巨噬细胞中的感染。引入 BLaER1 细胞作为替代髓系细胞模型,结合 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑,对SAMHD1催化核心位点引入突变,研究SAMHD1的抗病毒功能。这种新颖的方法为制定精确靶向SAMHD1的策略铺平了道路,而无需对其他细胞操作产生意外干扰。
这项研究创新的核心,即成功创建的敲除和敲入细胞系。Namocell单细胞分离仪进一步强调了它在推动细胞研究方法学方面的重要性。
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