2020年8月28日-29日，由中国健康传媒集团《中国合理用药探索》杂志、国家药典委员会《中国药品标准》杂志、山东省食品药品检验研究院、青岛市食品药品检验研究院共同主办的“中国药物制剂高质量发展研讨会---改良型新药&高技术壁垒仿制药”在青岛胜利召开。来自医药领域、药品监管、药物制剂领域的多位相关专家到会，进行了精彩的主题报告。其中，在“药物制剂的标准与质量”分论坛中，第十届药典委员会生化药品专业委员会委员、北京医恒健康科技有限公司董事余立做了“复杂成分药物的质控思路”的精彩汇报。MFI作为ProteinSimple用于药物制剂优化开发中检测不溶性微粒分析的技术仪器，备受客户推崇。ProteinSimple作为全球生命科学仪器制造商和技术提供商，参加了本次盛会。更多MFI信息请咨询ProteinSimple销售或技术人员。

传统的Western Blot，耗时长，手工操作多，重现性差（CV>35%）。遇到珍贵样本（蛋白量不足）通常会进行strip-reprobe（洗脱-重杂交）的方式进行蛋白质多靶点的分析。 然而，传统Western Blot进行strip-reprobe（洗脱-重杂交）时会面临：1.洗脱次数不够，无法充分解离靶点和抗体，影响二次杂交。2.洗脱次数太多，膜上靶点丢失太多，定量更加不准。3.每个靶点和抗体亲和力不同，没有通用试剂和方法。 为了克服这些局限性，ProteinSimple Jess RePlex技术正式上线！！ Jess RePlex检测技术特点：只需1份3μl样本(分选干细胞、免疫微环境细胞、珍稀临床样本等）2次连续自动检测：一根毛细管洗脱-重杂交技术结合Jess多通道检测：化学发光、双色红外荧光、总蛋白检测通道实现珍贵样品多靶点的定量检测分析（不同靶蛋白、靶蛋白不同亚型、靶蛋白磷酸化、样本总蛋白等） Jess RePlex检测原理：Jess RePlex应用举例：RePlex超高的洗脱效率RePlex中的关键步骤是在第一轮探测后能有效去除抗体。因此，评估了针对Jurkat和MCF7裂解物的pan AKT/AKT1/AKT2/p-AKT1/p-AKT2/p-GSK3b抗体的去除效率。结果显示，所有测试的抗体均显示出超过96％的去除效率，而大多数测试的抗体均显示出98％或更高的去除率。这些数据表明进行第二轮抗体探测时，与第一轮探测几乎没有交叉。RePlex出色的重杂交信号强度和高重复性为了证明探针1和探针2之间的信号强度和可重复性没有受到影响，在两个检测步骤中测量了MCF7裂解物中AKT1和AKT2抗体的信号强度。结果显示，不管检测每种蛋白质的顺序如何，在RePlex分析中在探针1或探针2中检测到的MCF7裂解物中的AKT1和AKT2在两个检测周期中均具有出色的重现性和相似的信号强度。一份样品不同靶点的检测RePlex检测技术可以检测同一样品中多种蛋白质磷酸化的状态变化，并对其进行定量分析（使用对照和经LY294002处理的Jurkat细胞的裂解物的p-AKT/p-GSK3b/p-cRaf的定量分析）。一份样品相近分子量靶点的检测利用RePlex技术表征了多种组织类型中AKT的磷酸化状态。同一毛细管中检测多种组织类型，包括肝，肾，结肠，脑，乳腺和肺中的panAKT和p-AKT。同时分析了不同组织中归一化panAKT后，p-AKT信号的变化，即不同组织显示出不同水平的AKT表达和磷酸化。一份样品多靶点的检测利用RePlex技术可以在第一轮免疫杂交中进行不同靶蛋白的测定，并在同一毛细管中进行第二轮总蛋白检测。利用未经处理和用人IGF1（hIGF1）处理过的MCF7细胞，第一轮检测Pan AKT（NIR通道）和p-AKT（化学发光通道），第二轮检测同一根毛细管中的总蛋白。结果显示，利用Jess不同通道以及RePlex技术可以达到一份样品获取多个靶点的定量数据。结论：传统Western Blot若从单个样本中获取更多的蛋白信息，即为了节省珍贵或昂贵的样品，需要进行strip-reprobe（洗脱-重杂交）。然而，众所周知该技术会遭受不可预测的蛋白质损失，并且通常需要冗长的优化以实现最佳的剥离效率并使蛋白质在印迹上的保留最大化。这使得几乎不可能使用标准的条带和探针技术进行任何定量分析。相比之下，Simple Western平台Jess开发的RePlex技术是一种优化的自动化两步免疫分析，可以实现多个靶标的高效抗体去除和出色的目标蛋白在样品毛细管中的保留，从而可以实现在一个样品中获得更多的蛋白信息。更多RePlex信息请咨询ProteinSimple销售或技术人员。

默克公司PPDM ADME Biologics部门利用全自动Western blot系统Wes，研究纳米抗体早期ADA免疫原性评估，文章发表在Journal of Pharmacological and Toxicological Methods：A capillary electrophoresis based approach for the identification of anti-drug antibodies against camelid VHH biologics (Nanobodies®), J Pharmacol Toxicol Methods. May-Jun 2020;103:106872.--研究背景--纳米抗体（Nanobody）：除了由包含两个重链和两个轻链的四个亚基组成的正常异四聚体抗体以外，骆驼科动物会产生独特的仅重链的抗原结合蛋白，其单个可变域（VHH）大小约为15kDa。纳米抗体是分离的VHH结构域，可以与短肽序列连接在一起，形成具有多对位或多特异性结合特性的多价模块化构建体。因此，纳米抗体被评估为潜在的生物治疗方法。抗药物抗体（Anti-drug-antibody，ADA）：蛋白质类药物的特异性，以及可调节的定位和靶向特性极大的改变了原有的药物临床使用领域。但基于蛋白质本身独特的复杂性，其药物制剂势必会具有引起抗药物抗体应答（ADAs）的潜力。而ADA的产生，对药物暴露、药物毒性作用、药物代谢动力学、药物效应动力学造成影响，甚至导致不良的安全后果。因此，对于ADA免疫原性评估在确定生物候选药物的最终临床成功方面非常重要。因此，默克公司利用ProteinSimple公司的全自动Western Blot系统Wes（可以高灵敏度和高精度地定量靶蛋白的水平），开发了一种WESADA平台，用于评价纳米抗体（Nb）药物开发过程中ADA的评估。ProteinSimple公司Wes工作原理：--研究内容--纳米抗体X、Y、Z构型纳米抗体X：由5个VHH组成：A，B，C，D和E。纳米抗体Y：由2个NHH组成：B和E。纳米抗体Z：由3个NHH组成：A，C和E。A和B：两种不同的抗鼠淋巴细胞激活基因3（LAG3）的VHH。C和D：两种不同的抗鼠编程性细胞死亡蛋白1（PD1）的VHH。E：结合白蛋白的VHH，用于延长半衰期。相同的35个氨基酸的GS-接头连接所有VHH。 纳米抗体X滴度测定为了确定固定在毛细管中的有效纳米抗体浓度，以纳米抗体X作为样本，进行2倍稀释（从80降至1.25μg/mL）进行上样，以两个ADA阳性样品和抗纳米抗体mAb1作为一抗，进行检测。最终选择20μg/mL作为所有毛细管固定的纳米抗体的默认浓度。WESADA更宽的动态信号范围将WESADA动态范围与其他两个常用的ADA分析平台进行了比较：1）MSD平台2）Gyros。为了在所有三个平台上进行比较，要求最小的信噪比等于或高于10。如图所示（▲：WESADA），WESADA平台展示了更宽的动态范围。ADA信号滴定WESADA信号用两种ADA阳性样品E和8的不同浓度进行滴定。当纳米抗体浓度固定时，ADA阳性样品E在5120倍稀释因子时有信号，而样品8在1280倍稀释因子才有信号。表明小鼠样品E的ADA滴度比样品8高。WESADA信号的特异性为了确认WESADA信号的特异性，将ADA阳性的小鼠样品与500μg/mL天然纳米抗体预孵育，再与纳米抗体X反应。结果显示，所有ADA阳性小鼠血清样品和阳性对照抗纳米抗体mAb1的AUC均降低61％至100％。证明了ADA对天然纳米抗体X的特异性。WESADA同时对每个毛细管的多个目标进行ADA分析为了测试WESADA同时进行ADA分析的可行性，将NanobodyX（5个VHH模块）单独上样，或者与NanobodyY（3个VHH模块）共同上样，跑胶后固化在毛细管上。再运行5种小鼠ADA阳性血清样品作为一抗进行检测。如图所示，WESADA可用于同一毛细管中固定多个纳米抗体来检测ADA。多聚纳米抗体的ADA特异性分析利用WESADA检测来确定哪些VHH模块负责检测到的ADA信号。给予纳米抗体X（模块A，B，C，D，E）的小鼠表现出很强的ADA反应，而给予纳米抗体Z（模块A，C，E）的小鼠表现出相对较低的信号反应。这表明模块B或D可能是针对纳米抗体X观察到的ADA信号的原因。为了测试这种可能性，选择5种针对纳米抗体X的ADA信号最强的血清样品（小鼠1，2，4，5，8，在图中标有*），对5种模块进行单独检测。结果显示，五分之四样品显示模块B的反应较高，而对模块A，C，D，E的信号则低至无法检测到。这表明模块B主要负责针对纳米抗体X的ADA响应。结论：蛋白类药物的不良免疫反应可能会对药物的药代动力学，功效和安全性产生不利影响。而抗药物抗体（ADA）的存在已成为免疫原性应答的关键决定因素。本文利用ProteinSimple的Wes系统建立了WESADA平台。可以对ADA的阳性样品进行鉴定，同时可以确定多价纳米抗体构建物中的哪个VHH模块刺激了主要的ADA反应。同时还允许对同一实验样品中具有不同分子大小的多个目标同时进行ADA分析。这种基于毛细管电泳的方法可对样品进行快速分析，而无需单独定制优化或试剂标记，同时只需消耗少量样品和药物。因WESADA检测到的任何ADA信号都可以与毛细管中药物的预期分子量大小相关，从而排除了非特异性结合，提供了信号对药物具有特异性的额外置信度。预示着WESADA平台有助于在蛋白类药物早期开发阶段对大量实验性候选药物进行便捷的免疫原性评估。

意大利San Raffaele科学院再生医学及干细胞和基因治疗科的科学家，利用Nanopro 1000在Cell Death and Differentiation（IF：10.717）发表文章：The proneural gene ASCL1 governs the transcriptional subgroup affiliation in glioblastoma stem cells by directly repressing the mesenchymal gene NDRG1.--研究背景--癌症干细胞（Cancer Stem Cells, CSCs）:通过自我更新和无限增殖维持着肿瘤细胞群的生命力；通过运动和迁徙能力使肿瘤细胞的转移成为可能；可以长时间处于休眠状态并具有多种耐药分子而对杀伤肿瘤细胞的外界理化因素不敏感。干细胞（Stem Cells）公认的功能定义是自我更新和产生分化后代的能力，因此对CSCs的定义也要证明这种功能特征：持续的自我更新；持续的增殖；二次移植后产生肿瘤的能力，即可以重述亲本肿瘤中存在的细胞异质性。除此之外，CSCs还具有与体干细胞相同的功能：包括组织（或肿瘤）内的频率，干细胞标志物的表达；以及生成多种谱系子代的能力。胶质母细胞瘤（GBM）是最普遍，最恶性的原发性脑肿瘤，其包含自我更新的致瘤性癌症干细胞（CSCs），可以促进肿瘤的发生，并且发生治疗抗性。正常的干细胞和祖细胞可以参与组织的发育和修复，同样，CSCs可以促进肿瘤的发展和进行性生长。因此，对控制CSCs的分子机制的研究，对GBM或其它脑癌治疗可以提供新型靶向疗法的开发方向。CSCs的调节因素包括：内在调节因子和外部调节因子。关键的内在调节因子包括：基因组成、表观遗传、代谢调节。外在调节因子包括：与微环境的相互作用、生态位因子、免疫系统。根据肿瘤的基因组成预测临床过程并提供治疗方法，对于提高疗效和防止患者过度治疗至关重要。这个概念也适用于成胶质细胞瘤（GBM）。多年来，已经根据肿瘤组织学对神经胶质瘤进行了分类，再加上肿瘤分级，来反映肿瘤恶性程度并在一定程度上预测了疾病进程的分类。直到最近，2016年世卫组织脑肿瘤分类将基于异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）状态的GBM遗传分类纳入组织学标准诊断。在可用于GBM的许多多维分子数据中，转录特征将GBM分为不同的亚组，即前神经（PN），间充质（MES），经典（CL）/增殖（P）和神经（NL）。鉴于20％的GBM并不是转录均质的，而是包含多个属于不同亚类的细胞群体，基于基因表达的GBM患者分层的临床意义和实用性仍在争论中。然而，深入了解GBM的转录特征可能有助于鉴定分子介体，这些分子介体不仅有助于增加对GBM发病机理的了解，而且还可以作为诊断，预后和/或预测性标志物纳入临床常规。通常GBM的进展和复发通常伴随着向MES分子表型的转变。但对于从PN到MES过渡（PMT）的机制知之甚少。--研究内容--意大利San Raffaele科学研究院再生医学及干细胞和基因治疗科的科学家们研究发现：ASCL1是PN GBM CSCs的特异性标记物为了鉴定能预测GBM CSCs转录亚型的基因标记物，对患者衍生的GBM CSCs系：即L0605，L0306，L0627，L0104，L0512和L0125进行了转录组谱分析。并与几位患者的GBM组织样本的转录谱进行了比较。作为非干性对照，分析了标准的人类神经胶质瘤细胞系（GCL）：即U87，U373，T98G和LN18，以及血清培养的原代GBM系。结果显示，CSCs与GBM标本的基因表达谱图非常相似。为了确定调节GBM分子亚组的分子介体，比较了CSCs和GCLs的全局基因表达谱。其中在CSCs中上调的基因列表中，选择了排名最靠前的前神经元亚组基因分类器ASCL1，并证实了它在CSCs及其异种移植物中的表达要高于GCL及其相应肿瘤中的表达。且在人的PN亚组中表达的增强。揭示ASCL1是CSCs特定的分子介体，可能在GBM亚组表型中发挥重要作用。GBM CSCs中的过表达ASCL1促进神经胶质细胞向神经元分化与GFP转导的模拟对照相比，CSCs系中的ASCL1过表达后，对其细胞的自我更新能力产生负面影响。且ASCL1过表达后，大多数CSCs中的增殖通路pERKThr202/Tyr204和pAKTSer473的激活被大大降低。在增生培养条件下（即存在EGF和FGF2的情况下），过表达ASCL1的CSCs仍会出现典型神经元样形态：即出现早期的Tuj1和晚期MAP2神经元标记物。同时GFAP-1R星形胶质细胞数量的减少，表明ASCL1的表达通过激活神经元分化并抑制神经胶质细胞而促进了CSCs中的谱系转换。ASCL1抑制MES基因NDRG1的表达通过研究发现，所有PN CSCs都表达ASCL1，而只有一些细胞表达NDRG1。而MES CSCs不表达ASCL1，却表达非常高水平的NDRG1。且实验表明NDRG1是MES的基因标记物，为了验证ASCL1是否可以直接调控NDRG1，通过利用NanoPro 1000检测发现，过表达ASCL1时，NDRG1及其磷酸化形式pNDRG1Thr346都大大降低。说明ASCL1抑制了NDRG1的表达。且后续实验证明ASCL1可以与NDRG1的启动子直接结合。说明ASCL1可以直接调控NDRG1，从而抑制PN GBM向MES表型转换的进程，为GBM提供了新的治疗机会。Nanopro1000蛋白质翻译后修饰图谱分析技术，同时检测蛋白质表达极其翻译后修饰。参考文献：The proneural gene ASCL1 governs the transcriptional subgroup affiliation in glioblastoma stem cells by directly repressing the mesenchymal gene NDRG1, Cell Death Differ. 2019 Sep;26(9):1813-1831. Cancer stem cells in glioblastoma, Genes Dev. 2015 Jun 15;29(12):1203-17.

近日，美国明尼苏达大学药学院药理学科学家，利用MFI，在权威杂志Journal of ControlledRelease（IF：7.901）发表文章：Freezing-induced Protein Aggregation - Role of pH Shift and Potential Mitigation Strategies, J Control Release. 2020 Jul 10;323:591-599.  --研究背景--在设计用于肠胃外给药的蛋白质药物产品中，聚集体的产生，除了在外观上引起不适之外，最重要的是它们具有细胞毒性作用，或是引起机体免疫原性应答。美国和欧洲药典对肠胃外药物产品中的不溶性聚集物有规定：对于小剂量的肠胃外药物，通过光阻法测量的小颗粒（≥10μm）和大颗粒（≥25μm）的推荐药典规范分别为≤6000/container和≤600/container。因此，预防和减轻蛋白质聚集对于维持蛋白质药物产品的安全性，功效和质量至关重要。药品加工步骤中，如纯化，搅动，冻融，填充，冻干，制剂成分，运输压力，都有可能将天然蛋白质转化为聚集体。而蛋白质溶液在配制为药物产品之前，通常以冷冻状态保存很长一段时间，所以，因反复冻融而产生的蛋白聚集体更应引起关注。蛋白质制剂如缓冲液可确保制剂的pH值在整个保质期内都保持在所需范围内。但在低温过程中，某些缓冲区的有效性可能会受到影响。例如，当冷冻含有磷酸二氢钠和磷酸二钠的水溶液（即磷酸钠缓冲液）时，磷酸氢二钠的选择性结晶导致冷冻浓缩液的pH降低，从而引起蛋白聚集体的产生。因此，本文旨在研究，在不同缓冲溶液的冻融循环过程中，两种模型蛋白质（牛血清白蛋白（BSA）和β-半乳糖苷酶（β-gal））聚集体的产生，以及这两种蛋白对缓冲液pH值变化的影响。同时，评价了添加的非结晶溶质对pH值变化的影响，以及pH改变对蛋白质聚集行为的影响。--研究结果--使用MFI表征冷冻和解冻后蛋白颗粒的形成利用MFI检测发现，无论何种缓冲液，BSA（10mg/mL）在制备和立即分析时均显示出较低的颗粒数。当这些溶液经受五个冻融循环时，在许多系统中颗粒数量都有小幅增加。但冻融循环在磷酸钠缓冲液（100mM）中导致的颗粒计数增加显著。加入纤维二糖（纤维二糖（一种还原糖）被用作模型非结晶溶质，一种冷冻保护剂）后，在磷酸钠缓冲液（100mM）中导致的颗粒数有明显缓解。利用MFI检测发现，β-gal（10mg/mL）在水中冻融后的颗粒数（?100,000）急剧增加，表明该蛋白质对PH值的极端敏感性。同样，β-gal在磷酸钠缓冲液（100mM）中导致的颗粒计数增加显著。加入纤维二糖后，在磷酸钠缓冲液（100mM）中导致的颗粒数有明显缓解。低温pH测定将PBS和磷酸钠（100mM）冷却后，发现pH值变化幅度相似。当磷酸钠浓度为10mM时，冷却时的pH值变化不明显。而蛋白质的添加（10mg/mL）可以降低了PBS和磷酸钠（10mM）中pH值变化的幅度。当磷酸钠浓度很高（100mM）时，蛋白质的作用就不那么明显了，这表明，低蛋白浓度（10mg/mL）似乎不足以抑制缓冲盐的结晶和随之而来的pH偏移。低温XRD测定研究结果发现，当将磷酸钠缓冲溶液（10和100mM）冷却时，在-15°C时Na2HPO4•12H2O结晶明显（分别参见图4B和4C）。而BSA的添加，可以使Na2HPO4•12H2O的峰强度降低，特别是在较低的缓冲液浓度（10mM）下更为明显。这与观察到的BSA对缓冲溶液pH值变化幅度的影响密切相关。此外，纤维二糖的添加完全抑制了缓冲盐的结晶（图4D），以及冰峰的强度也受到了抑制。这些结果揭示了非结晶溶质在蛋白质制剂中的附加作用。通过抑制缓冲盐的结晶和随之而来的pH值变化，这些赋形剂可防止蛋白质不稳定性。热分析结果显示，当将BSA添加到PBS中时，在-54.4℃出现玻璃化转变温度（Tg′），随后在-22.4和0.1℃出现两个吸热峰。玻璃化转变温度反映了冷冻浓缩物组成发生了改变。BSA仅对100mM缓冲液的热行为有明显影响，导致Tg’（-47°C）和结晶温度（-30°C）降低。同时，纤维二糖的添加有望改变冷冻浓缩物的成分，这在Tg’（-34°C）中有所体现。结论：磷酸盐缓冲液被广泛用于肠胃外蛋白质制剂中。但在冷冻过程中，磷酸氢二钠（十二水合物）的选择性结晶会降低冷冻浓缩液的pH值，从而导致蛋白质聚集。可以通过降低缓冲液浓度来减小pH偏移。同时，BSA和β-gal可以通过对缓冲液结晶的抑制，减少pH的变化，但其作用程度要取决于缓冲液浓度。其它非结晶性赋形剂（纤维二糖）的添加，可通过抑制缓冲盐结晶，来提高蛋白质的稳定性。

中国科学院大学，中国科学院生物物理研究所阎锡蕴课题组，北京大学第一医院神经内科郝洪军主任，利用全自动Western系统Wes，在期刊Theranostics(IF:8.063)发表文章：Soluble CD146, a Cerebrospinal Fluid Marker for Neuroinflammation, Promotes Blood-Brain Barrier Dysfunction, Theranostics. 2020 Jan 1;10(1):231-246.Daji Wang1*, Hongxia Duan2*, Jing Feng2, Jianquan Xiang4, Liqun Feng5, Dan Liu2, Xuehui Chen2, Lin Jing2, Zheng Liu2, Dexi Zhang2, Hongjun Hao3 ?, Xiyun Yan1,2 ?1 Savaid Medical School, University of Chinese Academy of Sciences, Beijing, China.2 Key Laboratory of Protein and Peptide Pharmaceutical, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, Beijing, China.3 School of Basic Medical Sciences, Southwest Medical University, Sichuan, China.4 Beijing Anzhen Hospital, Capital Medical University, Beijing, China.5 Neuroimmunology Laboratory, Peking University First Hospital, Beijing, China.* Contributed equally as first authors? Contributed equally as last authorsCorresponding author: Hongjun Hao, MD, Xiyun Yan, MD--研究背景--血脑屏障（Blood-Brain Barrier, BBB）的完整性对维持中枢神经系统（Central Nervous System, CNS）微环境的稳态具有非常重要的生物学意义。血脑屏障是一种多细胞构成的血管结构，其主要成分包括血脑屏障内皮细胞、毛细血管基底膜、星形胶质细胞和周细胞。这些细胞形成的多层膜结构，构成了极低速率的渗透性屏障。BBB的完整性和低通透性对于中枢神经系统（Central nervous system，CNS）的正常神经元功能至关重要。BBB将CNS与外周血循环系统分离开来，严格控制分子和离子的进出，及时输送营养和氧气，保护大脑免受毒素和病原体的侵害。BBB功能障碍是多种神经炎症性疾病发生的标志性事件，包括脱髓鞘疾病、脑部感染等。然而目前对血脑屏障破坏的分子机制了解有限，临床上仍缺乏有效或可靠的生物标志物用于血脑屏障损伤的早期诊断。 可溶性CD146（sCD146）主要来自血管内皮细胞（EC）。该实验室的先前研究证实，多发性硬化症（MS）的患者的脑脊液（Cerebrospinal Fluid, CSF）中可溶性CD146（sCD146）水平增加，并且sCD146与BBB损伤的临床参数呈正相关，表明sCD146参与了BBB破坏。此外，许多报告显示血清sCD146异常升高与炎症条件下的EC活性和通透性有关。在该实验室先前的研究中，也证实sCD146通过促进免疫细胞跨BBB的迁移而促进炎症。然而，尚不清楚sCD146是否直接导致BBB功能障碍。 --研究内容--本实验室收集了823例临床病人的血清和脑脊液样本（患有神经炎性疾病的患者为562名（68.3％），患有MS的患者为44名（5.3％），患有非炎性神经系统疾病的有217名（26.4％）），检测结果证实了脑脊液中的sCD146对监测BBB损伤和神经炎症的敏感性。并且通过体外实验证实了sCD146通过整合素αvβ1介导的细胞内信号转导，直接损害了人脑EC的屏障功能。因此，CSF sCD146可作为评估多种神经系统疾病早期BBB损伤的有希望的诊断指标，并可作为多种神经炎性疾病的潜在治疗靶标。sCD146在体外可促进血脑屏障通透性本文利用全自动Western系统Wes，对与BBB通透性相关的细胞表面紧密连接蛋白（TJPs）（Occludin，ZO-1，JAM-1），以及与BBB-ECs凋亡相关信号通路蛋白(caspase9, caspase3, Bcl-2, Bax)进行定量。结果显示，sCD146通过降低TJPs的表达，并促进BBB-ECs的凋亡，增加了BBB的通透性，表明sCD146是一种参与BBB功能障碍的新型分子。sCD146通过整合素αvβ1激活hCMEC/D3细胞MAPK，Akt和NF-кB信号通路本文利用全自动Western系统Wes检测结果显示，sCD146可以激活上调ECs凋亡和通透性的信号通路蛋白：MAPK（p-p38, p-ERK, p-JNK）, Akt(p-Akt), NF-кB(p-p65)。且抑制整合素αv或β1，MAPK和AKT磷酸化显著减少，说明整合素αvβ1参与了sCD146诱导hCMEC/D3细胞通透性的信号通路。阻断整合素αvβ1可减轻sCD146诱导的BBB功能障碍

5月15日，欧洲多个传染性疾病研究中心：意大利国家传染病研究所，德国美因茨大学，英国伦敦大学感染与免疫学系，健康生物医学研究中心等，使用Ella Simple ELISA系统检测新冠肺炎细胞因子风暴，数据发表在感染性疾病学杂志CLINICAL INFECTIOUS DISEASES（IF：9.055），阐明细胞因子风暴和细胞毒性细胞减少的相关性。文章：An Inflammatory Profile Correlates With Decreased Frequency of Cytotoxic Cells in COVID-19, Clin Infect Dis. 2020 May 15;ciaa577.---研究摘要---新冠肺炎由SARS-CoV-2感染引起，约80%患者为轻度肺炎（发烧，流鼻涕，全身不适，干咳和疲劳），14%发展到急性呼吸窘迫综合征（ARDS）为特征的重症肺炎，5%为危重症肺炎（发生呼吸衰竭及多器官衰竭），但其致病机制仍然不清楚。T细胞在抗病毒免疫反应和长期免疫保护中起着重要作用。已有研究表明SARS-CoV和MERS-CoV的疾病严重程度与过高的炎症反应和淋巴细胞减少相关。重症COVID-19患者显示出更高水平的T细胞活化，T淋巴细胞数量减少（有文章提示活化诱导的细胞死亡是重要机制），高水平的抑制性分子，这些抑制性分子与T细胞功能的降低相关，导致无效的免疫反应。此外，细胞毒性细胞（例如先天性免疫的NK细胞和获得性CD8T淋巴细胞）表达高水平的抑制性受体NKG2A，降低了穿孔素和颗粒酶水平，这表明SARS-CoV-2感染期间细胞毒性免疫反应受损。---研究结果---1. COVID-19患者免疫特征：炎性细胞因子增加+淋巴细胞减少本研究利用Ella Simple ELISA 多因子Panel检测了健康人群和COVID-19患者中的细胞因子风暴相关因子：IL1β，IL-6，IL-8，TNF-α。结果显示：与健康人群（HD）相比，在COVID-19患者中观察到更高水平的炎症细胞因子，淋巴细胞减少。2. PCA分析得出细胞毒性细胞减少与疾病严重程度成正相关对COVID-19患者的免疫学特征进行PCA分析，第1组（蓝色）：TNF-α，CD3和淋巴细胞计数；第2组（黄色）：细胞毒性细胞（Perforin + CD3，Perforin + CD8，Perforin + Vd2和Perforin + NK）；第3组（灰色）：炎性细胞因子（IL1β，IL-6和IL-8），先天免疫 （Vδ2T和NK细胞）和抑制细胞（MDSC）。3. 矩阵分析：炎症性因子和抑制性细胞与细胞毒性细胞存在负相关通过对14个连续变量之间执行相关矩阵分析，结果得出IL-6和IL-8与先天（NK细胞）和获得性（CD3）免疫细胞中的穿孔素含量均呈负相关。4. 重症患者的NK细胞活性受损为了评估细胞毒性活性是否与疾病的严重程度相关，将患者分为健康人群（HD），肺ICU患者（noICU）和重症监护病房患者（ICU）。结果显示，与noICU和HD相比，ICU患者的perforin + NK细胞的百分比更低，表明重症患者的NK细胞活性受损。

近日，法国里昂南部医院，里昂人民医院，里昂民用医院联合研究组及里昂大学国际传染病学研究中心的科学家们，利用Ella在权威期刊Journal of Allergy and Clinical Immunology发表文章：Type I IFN Immunoprofiling in COVID-19 Patients, J Allergy Clin Immunol. 2020 Apr 29;S0091-6749(20)30578-9.---研究背景---干扰素及分类干扰素是一种细胞因子蛋白，能够激活人体免疫细胞（如巨噬细胞和天然杀伤细胞），有效的干扰病毒复制，增强宿主的防御力。受感染的细胞会释放干扰素，保护宿主细胞免受病毒、寄生虫、细菌等多种病原体的侵袭。人体产生的已知的干扰素共有13种（小鼠中有14种）分为三大家族：I型，II型，III型。I型干扰素以IFN-α与IFN-β为主由先天性免疫细胞分泌；II型干扰素即IFN-γ，主要由活化后的T细胞分泌产生；III型干扰素为几种IFN-λ，其已知的分布与功能都比较有限。I型干扰素的产生I型干扰素是参与抗病毒免疫的重要效应分子。它的产生主要由先天性免疫细胞（主要是巨噬细胞）表面或内部受体（Toll like receptor，NOD like receptor，RIG-I receptor，cGAS等）接触到病毒特异性的抗原物质（DNA,RNA），然后通过胞内的信号分子传递（MAVS，STING，TBK，IKK等），最终激活转录因子IRF3/7从而启动I型干扰素基因的表达。I型干扰素的抗病毒免疫保护效应及负面效应I型干扰素通过诱导下游一些ISG（IFN stimulated gene）的表达，从而达到抑制病毒复制的能力。同时，I型干扰素作用于APC（抗原呈递细胞）增强其抗原呈递功能，并增强包括B细胞，T细胞和NK细胞在内的获得性免疫细胞的抗病毒功能，它们通过产生抗体（B细胞）和细胞毒性反应来限制病毒感染（T细胞和NK细胞）。在慢性病毒感染期间，I型干扰素可诱导免疫抑制细胞因子（如白细胞介素10（IL-10））的产生，以及诱导T细胞抑制受体（如PD1）在配体（如PDL1）的APC上表达，导致T细胞功能的抑制和清除感染失败。在急性病毒感染（例如流感病毒）期间，髓样细胞（如浆细胞样树突细胞（pDC）和炎性单核细胞）产生的I型干扰素会导致死亡受体TRAIL在炎性单核细胞和TRAIL配体DR5上的表达上调。表达TRAIL的炎性单核细胞然后通过杀死上皮细胞诱导免疫病理学和宿主发病率或死亡率。---研究内容---严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）感染（COVID-19）的特征为无症状携带，或轻度至重度上呼吸道疾病，可演变为呼吸衰竭或迅速发展为严重病毒性肺炎患有急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。此外，在显示与ARDS相关的细胞因子风暴的患者中，已经鉴定出过度的免疫反应。临床建议使用多种免疫抑制药物，包括IL-6阻滞剂或JAK-STAT信号抑制剂来治疗SARS-COV-2感染，而其它的临床实验正在评估使用重组干扰素促进宿主抗病毒反应的能力（临床试验NCT04315948，NCT04293887）。I型干扰素（IFN-I）是先天免疫系统的主要成分，代表关键的抗病毒分子。迄今为止，尚未在COVID-19患者中评估IFN-I应答，并且其对病毒控制和炎症的贡献尚不清楚。本研究评估了COVID-19患者血浆IFN-1的动力学参数。为重组干扰素-α2的早期干预提供了新的论据，并且突出了疾病第二阶段进行免疫抑制剂的论据，为COVID-19治疗开辟了新途径。本文利用Ella对IFN阳性和缺陷型患者血浆样本中的CRP, IL-6, IP-10浓度进行检测。CRP, IL-6 and IP-10 concentrations were measured using a multiplexed assay with the Ellaplatform.参考文献：1. Type I IFN Immunoprofiling in COVID-19 Patients, J Allergy Clin Immunol. 2020 Apr 29;S0091-6749(20)30578-9.2. Type I interferons in infectious disease, Nat Rev Immunol. 2015 Feb;15(2):87-103.

--蛋白裂解靶向嵌合体（PROTAC)--蛋白裂解靶向嵌合体(Proteolysis targeting chimeras,PROTAC)是一种新兴的药物分子设计形式，靶结合配体与E3连接酶结合配体通过linker进行共价连接。这样一个双重功能的分子，一端可以结合目标蛋白，另一端结合E3连接酶，将两者形成靶蛋白-PROTAC-连接酶三元复合物，通过E3进行泛素化，从而使目标蛋白降解。--全自动定量Western Blot 定量蛋白降解水平--为了表征降解蛋白的水平，研究人员通常使用传统的SDS-PAGE Western印迹方法绘制量效曲线。但是冗长的手动操作以及由此导致的结果重现性差，使传统的SDS-PAGEWestern成为测定DC50值不可靠。全自动定量Western Blot，可以3小时内完成定量Western Blot，覆盖2kDa-440Da的靶蛋白。快速定量，高重现性，微量样本等特点，使用使Simple Western系列成为PROTAC研究靶蛋白降解的量效关系的理想解决方案。辉瑞制药：靶向BTK的PROTACsBTK是非受体蛋白酪氨酸激酶Tec家族的成员，是B细胞抗原受体（BCR）信号通路中的关键激酶，能够调节正常B细胞的增殖、分化与凋亡。BTK信号的异常调节与许多B细胞恶性肿瘤有关，是治疗血液肿瘤的理想靶点。辉瑞全球研究与发展部内科医学研究室的科学家，筛选了11种化合物的PROTAC文库。使用全自动定量Western Blot检测靶蛋白BTK降解的量效关系和时效关系。参考文献：Delineating the role of cooperativity in the design of potent PROTACs for BTK. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018 Jul 31;115(31):E7285-E7292.葛兰素史克：靶向CDK4/CDK6的PROTACs细胞周期控制是癌症的一个标志性特征，CDK4/6在许多癌症中过度活跃，导致细胞增殖失控。CDK4/6是细胞周期的关键调节因子，能够触发细胞周期从生长期（G1期）向DNA复制期（S1期）转变。在雌激素受体阳性（ER+）乳腺癌中，CDK4/6的过度活跃非常频繁，而CDK4/6是ER信号的关键下游靶标。因此，CDK4和CDK6抑制剂已成为FDA批准的针对乳腺癌患者的重要治疗选择。辉瑞全球研究与发展部内科医学研究室的科学家，筛选了11种化合物的PROTAC文库。使用全自动定量Western Blot检测靶蛋白BTK降解的量效关系和时效关系。参考文献：Delineating the role of cooperativity in the design of potent PROTACs for BTK. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018 Jul 31;115(31):E7285-E7292.葛兰素史克：靶向CDK4/CDK6的PROTACs细胞周期控制是癌症的一个标志性特征，CDK4/6在许多癌症中过度活跃，导致细胞增殖失控。CDK4/6是细胞周期的关键调节因子，能够触发细胞周期从生长期（G1期）向DNA复制期（S1期）转变。在雌激素受体阳性（ER+）乳腺癌中，CDK4/6的过度活跃非常频繁，而CDK4/6是ER信号的关键下游靶标。因此，CDK4和CDK6抑制剂已成为FDA批准的针对乳腺癌患者的重要治疗选择。英国葛兰素史克（GlaxoSmithKline）药物研究中心，利用全自动定量Western Blot检测不同的E3 ligase binder的PROTACs对靶蛋白RIPK2的降解水平，从而筛选合适的PROTACs候选物。参考文献：Extendedpharmacodynamic responses observed upon PROTAC-mediated degradation of RIPK2, CommunBiol. 2020 Mar 20;3(1):140.英国Dundee大学：靶向BDR9的PROTACs的DC50和半衰期BDR9属于BRD家族（含Bromodomain结构域）的第四个亚型，是哺乳动物SWI/SNF染色质重塑复合物的重要组成部分。人类肿瘤中SWI/SNF亚基突变的高发病率及几种癌症中BRD9的过表达，表明BRD9是抗癌症药物的潜在靶标，因此BRD9抑制剂可以作为新型抗肿瘤药物的候选药物。英国Dundee大学生命科学学院生物化学与药物发现系的科学家，利用全自动定量Western Blot，检测靶向降解BRD9的PROTACs-26药物的DC50和半衰期。参考文献：IterativeDesign and Optimization of Initially Inactive Proteolysis Targeting Chimeras (PROTACs) Identify VZ185 as a Potent, Fast, and Selectivevon Hippel?Lindau (VHL) Based Dual Degrader Probe of BRD9 and BRD7, J Med Chem. 2019Jan 24;62(2):699-726.英国Dundee大学：靶向SMARCA2/4的PROTACs量效曲线BAF/PBAF染色质重塑复合物在约20％的人类癌症中发生突变，BAF/PBAF复合物包含两种ATPase：SMARCA2/4。因此靶向SMARCA2/4，是癌症治疗药物开发的重要方向。英国Dundee大学生命科学学院生物化学与药物发现系的科学家，利用全自动定量Western Blot，检测靶向SMARCA2/4蛋白降解的量效关系。参考文献：BAF complex vulnerabilities in cancer demonstrated via structure-based PROTAC design. Nat Chem Biol. 2019 Jul;15(7):672-680.参考文献：Targeted protein degradation by PROTACs, Pharmacol Ther. 2017 Jun;174:138-144.

最近的预印本杂志bioRxiv发表了德国波恩大学，夏里特大学，德国马克斯·普朗克精神病研究所等单位联合研究成果，阐述了SARS-CoV-2病毒可以抑制自噬。亚精胺，MK-2206，氯硝柳胺等作用于自噬的小分子化合物，可以作为抗病毒潜在治疗药物。Analysis of SARS-CoV-2-controlled autophagy reveals spermidine, MK-2206, and niclosamide as  putative antiviral therapeutics（bioRxiv preprint doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.15.997254）研究摘要 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)对公共卫生和世界经济构成严重威胁，至今没有批准的有效药物或疫苗。代谢依赖的细胞途径的药理学调节，如自噬，减少了传播高致病性中东呼吸综合征(MERS)-CoV。（该单位之前研究，SKP2 Attenuates Autophagy Through Beclin1-ubiquitination and Its Inhibition Reduces MERS-Coronavirus Infection, Nat Commun, 10 (1), 5770 2019 Dec 18.）本研究，作者发现SARS-CoV-2感染通过干扰多种代谢途径来限制自噬。体外靶向自噬诱导的化合物可以减少SARS-CoV-2在体外的释放。对自噬信号和代谢组学的深入分析表明，SARS-CoV-2通过限制AMP-蛋白激活激酶（AMPK)和mTORC1的激活，来减少糖酵解和蛋白质翻译。感染还下调了自噬诱导的亚精胺，并促进AKT1/SKP2依赖途径自噬启动蛋白Beclin-1(BECN1)降解。外源性给药亚精胺、AKT抑制剂MK-2206和稳定Beclin-1、抗螺旋肽药物氯硝柳胺分别抑制SARS-33CoV-2的释放达到85%、88%和99%。可以作为潜在的抗SARS-CoV-2的药物。Wes全自动定量Western Blot检测ATG14天然寡聚体ATG14是新冠病毒感染，抑制自噬信号通路中的关键蛋白，其寡聚体降低的水平反应自噬被抑制的水平。Wes全自动定量Western blot所有结果为全膜数据，可以在单次实验中，同时检测蛋白单体及其寡聚体，并定量变化。Fig.2: SARS-CoV-2 hijacks autophagy signaling on multiple regulatory levels. VeroFM cells were infected with SARS-CoV-2 319 (MOI = 0.0005) and harvested at 8 h, 24 h, or 48 h post infection (h p.i.). Protein levels and phosphorylation status of selected autophagy-relevant proteins were determined by Western blotting. For analysis of ATG14 oligomers (bottom panel, left) cells were incubated with a chemical crosslinker (DSS) 2 h prior to cell harvest (for detailed protocol see methods section). Cell  extracts were separated and immunoblotted using Wes (ProteinSimple) capillary electrophoresis. Error bars in all panels denote standard error of mean derived from n = 3 biologically independent experiments. Tp

Bio-Techne火热招募 | Luminex多因子检测战略合作服务商作为多因子检测试剂研发的领先者，Bio-Techne面向市场，诚邀业界专业多因子检测服务商成为战略合作伙伴。从而实现多因子检测的一站式服务，助力多方共赢！ 如您公司或实验室备有Luminex 仪器并有意合作，欢迎合作伙伴们踊跃报名，充分发挥自身优势。 一经评估符合要求的服务商，即可成为Bio-Techne多因子检测认证服务商，为我们的客户提供检测服务，同时享受其他更多开放权利。 服务商合作详情，请联系021-52380373-295或发送邮件至marketing.cn@bio-techne.com。 关于Luminex多因子检测Bio-Techne旗下R&D Systems®品牌的Luminex高性能High Performance系列，作为金标准ELISA试剂盒高品质的延伸，充分依托Bio-Techne在试剂盒研发过程中的独特优势，并执行严格广泛的优化操作，在检测准确度、特异性及批次间稳定性方面一直处于行业领导者地位。Bio-Techne Luminex试剂盒仅需25μL（部分指标仅需少至1μL）样本，实现单孔定量检测多达50个指标。相较于单因子定量检测，Luminex检测在节约时间、样本及经费方面具有独特优势。Bio-Techne Luminex产品在Nature Medicine等权威杂志有多篇应用文献发表，已成为国内外重点药企、高校及医院首选的多因子筛选及验证品牌。现有种属覆盖人、灵长类、小鼠、大鼠等，特色产品包括灵长类35 Plex（同时检测35个因子）大规模生物标志物筛选组合（货号FCSTM21）、人45 Plex 炎症感染筛选验证组合（LKTM014，中国现货）、人16 Plex高灵敏细胞因子筛选组合 (FCSTM14，FCSTM09，最高检测灵敏度高达0.04 pg/mL，中国现货) 及350因子内自由选择的Luminex 筛选系列。目前Bio-Techne Luminex产品在肿瘤早期诊断、预后监测及风险评估，心血管疾病，糖尿病，肥胖，传染性疾病，自身免疫病，神经性疾病等机制及生物标志物的研究，细胞治疗CRS监控，药效评估及毒性研究中均有广泛应用。现有三家认证合作服务商，分别是北京国典医药有限公司、广州维佰生物科技有限公司及上海华盈生物医药科技有限公司，可为广大客户提供专业的Luminex多因子检测服务。  更多内容详见Bio-Techne中国官网或官方微信：RnDSystems关于Bio-TechneBio-Techne 是生物公司中率先登陆纳斯达克（Nasdaq）的拓荒者之一，2007 年，在上海成立中国分公司，助力中国生命科学事业的发展与腾飞，目前旗下已拥有 R&D Systems®、Novus Biologicals®、Tocris®、ProteinSimple®、PrimeGene® 和 Advanced Cell Diagnostics 等众多一线品牌。Bio-Techne 历经几十年的发展，在不断创新的生命科学领域展现出了强大的实力和高度的专业性，将匠人精神发挥到极致，严苛的质控环节甚至可以保证产品在十余年间的批次稳定性。这种科学匠心使 Bio-Techne 屡获殊荣，如：2017 年，Bio-Techne 被英国高等教育部门指定为官方抗体供应商；2018 年，Bio-Techne 荣获 CiteAb Awards 含金量最高的“研究者之选”奖；2019 年，Bio-Techne横扫CiteAb Awards“研究者之选”、“年度ELISA试剂盒公司”、“地区取得成功的抗体公司”三项大奖。2020年，Bio-Techne 再次荣获 CiteAb颁发的“研究者之选”奖。?

Ella细胞因子风暴检测在国内小试牛刀COVID19的预后与细胞因子风暴密切相关，因而细胞因子检测被写入第七版诊疗方案，多个细胞因子阻断剂（如托珠单抗）临床试验正在开展。自一月份新冠肺炎疫情爆发之后，Ella系统被广泛用于国内临床研究，托珠单抗等药物临床试验，检测细胞因子风暴Panel（具体Panel见文末）。例如：参与科技部国家重点研发计划：法匹拉韦与托珠单抗组合的临床研究，负责细胞因子检测。 美通社新闻报道Ella检测细胞因子风暴在欧美大显身手西奈山伊坎医学院正在利用Bio-Techne的Ella自动免疫分析平台来监测COVID-19的细胞因子释放综合征(CRS)，以帮助指导医院护理，并测量COVID-19患者临床试验中对实验药物的反应。西奈山，意大利和整个欧洲的医院，在这场危机中，已经并正在继续采用ELLA平台进行CRS测试。Ella的高敏感性，简化工作流程，和1.5小时得到结果，使其成为CRS测试的理想选择，是推动这种采用的关键因素。新闻链接：https://www.prnewswire.com/news-releases/bio-technes-ella-on-the-front-lines-in-fight-against-covid-19-301029692.html Ella细胞因子风暴检测Panel

美通社新闻：生物技术企业Bio-techne和Maravai生命科学部门Cygnus技术公司，宣布了达成战略合作伙伴关系，在Bio-techne旗下ProteinSimple™的Ella™免疫分析平台上开发定量CHO-HCP检测方法。根据协议条款，Bio-Techne和Cygnus将共同开发的第三代CHO-HCP免疫分析试剂盒。HCP检测是生物制药开发中的关键质量控制步骤，因为这些杂质在最终产品中的存在可能会干扰药物的有效性，导致不期望的免疫反应或影响药物的稳定性。监管当局为生物制药公司提供了关于清除HCP的建议。生物制药制造商监控HCPs，以证明其纯化过程的重现性，确保HCP的清除并进行产品批量放行检测。Cygnus技术公司的第三代CHO-HCP ELISA试剂盒一直被认为是CHO-HCP杂质定量的金标准。该试剂盒中使用的抗体已通过抗体亲和提取和质谱方法，并对CHO细胞株中1000多个HCPs的反应性进行了评估。该试剂盒已为原料药，过程中样品，提供了特异性和敏感性，以及检测CHO-HCP杂质的重现性，以支持监管合规。ELLA平台允许用户在90分钟内进行高质量的免疫检测，无需人工干预。这种创新的免疫分析技术使公司能够减少过程开发的迭代时间和开销负担。Bio-techne蛋白质科学部门的总裁Dave Eansor评论说：“我们对这一伙伴关系感到兴奋，因为它为生物工艺部门提供了一种基于平台的自动化方法来进行杂质测试。快速有效的过程开发和监控对于生物制药公司以成本效益的方式提供安全有效的产品至关重要。Cygnus技术公司的创始人和总裁Ken Hoffman评论说：“我们的许多生物制药客户正在开发越来越多的生物治疗药物，生物相似药物的开发也在增加。为了跟上越来越多的项目，过程开发和制造质量控制团队希望更快和更高的通量HCP杂质检测。我们的伙伴关系为快速高效的生物工艺杂质检测提供了一种自动化解决方案。”关于Cygnus TechnologiesCygnus技术公司开发、制造和销售检测试剂盒和相关服务，使制药和生物技术公司能够在生物治疗学中检测和识别宿主细胞杂质，这是监管审批和质量控制过程中的一个重要步骤。凭借产品、服务和专家咨询，Cygnus帮助生物制药公司迅速将新的治疗技术通过开发和批准阶段推向市场。Cygnus技术公司总部设在北卡罗来纳州的Southport，通过一个全球网络为世界各地的客户提供服务。Cygnus技术于2016年被Maravai生命科学公司收购。关于Bio-techneBio-techne(NASDAQ：TECH)是高质量纯化蛋白质和试剂解决方案的优质开发商和制造商，特别是细胞因子和生长因子、抗体、免疫分析、生物活性小分子化合物、组织培养试剂以及细胞和基因治疗工作流解决方案，包括T细胞活化技术。Bio-techne的产品还包括以ProteinSimple品牌出售的蛋白质分析解决方案，为研究人员提供高效和简化的自动western blot和简化灵敏的ELISA技术。这些试剂和蛋白质分析出售给生物医学研究人员以及临床研究实验室，构成蛋白质科学部分。Bio-techne还为OEM和临床客户开发和制造诊断产品，包括FDA质控、校准样品、血气和临床化学控制以及其他试剂。Bio-techne的基因组工具包括用于研究和临床使用的先进的基于组织的原位杂交分析(ISH)，在ACD品牌下销售，以及一系列临床分子诊断肿瘤学测试，包括用于前列腺癌诊断的ExoDx Prostate(IntelliScore)测试(IntelliScore)。这些诊断和基因组产品包括Bio-techne的诊断学和基因组学部分.Bio-techne由科学研究，生物过程和分子诊断的组成，揭示了特定疾病的性质、诊断、病因和进展。它们有助于药物发现工作，并为准确的临床测试和诊断提供了手段。Bio-Techne拥有数千种产品，2019财年净销售额约为7.14亿美元，在全球拥有2200多名员工。备注：有关Ella™  CHO-HCP 检测试剂盒在中国的上市计划，我们将在后续更新。更多Ella™ 新一代微流控免疫学检测技术平台信息，请咨询ProteinSimple中国

美通社消息：生物技术公司Bio-techne(NASDAQ：TECH)近日宣布旗下ProteinSimple™品牌的Ella™自动免疫分析平台推出一种新的8plex检测板。这种新型检测板可同时对32样本进行8个不同靶点分析，为ELLA平台带来了更高的多因子检测能力。基于Ella™的32x8检测板，用户可以选择预先验证过的，8种不同的分析靶点组合，这些靶点被认为是各种疾病(包括炎症和癌症)的生物标志物。新型多重检测板和之前发布的单因子检测板结果有高度一致性，方便用户在不同的检测板格式间进行实验无缝转移。Bio-Techne蛋白质科学部门总裁Dave Eansor评论说：“32x8检测板将Ella平台性能拓展到了关键的多因子检测水平。在仅25μl体积的珍贵生物样品中，监测8种靶点，且具有极高的灵敏度和精密度，这是临床生物标志物研究的重大突破。”ELLA平台允许用户在90分钟内进行高质量的免疫检测，无需人工干预。这种创新的免疫分析工作流程减少了研究的迭代时间，并使工作人员能够将时间花在更高价值的活动上。目前提供的其他Simple plex检测板，包括用于测量多达4个生物标记，16或32个样本检测板、单因子72样本检测板，用户自己定制的开放式检测板。

生物药品活性成分常用检测方法及局限性随着生物药品的迅速发展，研究人员将面临的一项挑战任务是开发一种可靠、耐用和高效的检测方法，以在体外和体内检测和量化有效的生物药品成分。最常用的方法包括经典配体结合测定(LBAS)、LC-MS的测定，以及新出现的LBA-LC-MS混合技术。LC-MS和LBA-LC-MS是一个技术先进的方法，但是操作复杂，周期长，通量低，成本高，不适合于快速筛选和早期开发研究大样本量的实际需求。对于LBAS而言，ELISA是最常用的用于定量目的的方法。虽然在技术上要求较低并且成本低，但它高度特异性的抗体对，但是新的重组肽或蛋白质通常是不容易拿到高质量的抗体对。筛选可用的抗体对是耗时和费力的，涉及昂贵的纯化步骤，并且依赖于使用的动物。另外，抗体可能无法检测所有重组蛋白质构建体变体。另一种常见的LBA是传统的Western印迹法，但是无法准确定量，操作繁琐，不稳定，不符合生物药品准确性，耐用性和稳定性的要求。基于Wes建立生物药品活性成分检测方法（体外稳定性实验和体内药物代谢动力学）俄亥俄州立大学药学院的科学家，基于ProteinSimple的Wes定量Western blot技术开发了一种新的，高效，高灵敏度的定量工具，以支持治疗性重组蛋白的早期开发，避免上述限制。An efficient and quantitative assay for epitope-tagged therapeutic protein development with a capillary western system，Bioanalysis，Published online:20 March 2019。简述：本研究使用的重组蛋白，分子量约为55kDa，N端6X-His-标记，C末端DYKDDDDK(FLAG)。抗体：生物素化的抗Flag抗体，链霉亲和素-HRP。Wes单次可以检测25个样品，在从样品处理开始到数据采集的6小时内（Wes操作及检测时间约为3.5小时).LLOQ为0.4nM(20ng/mL)。作者基于该平台完成了一个方法开发快，高效的，检测速度快的重组蛋白类药物的体外稳定性研究和药代动力学（PK）研究的技术平台，且无需产生特异性单克隆抗体。该方法也消除了目标蛋白富集步骤，富集可能引入显著的样本间变异性。Wes自动化的免疫测定平台，基于毛细管电泳技术，整合了免疫学检测方法。在生物制药领域具有一系列独特优势1. 全程自动化2. 精密度高3. 耐用性好4. 灵敏度高5. 准确定量部分结果精密度体外稳定性实验体内药物代谢动力学（PK）实验作者文章总结• Development and validation of a reliable, robust and efficient assay to detect and quantifymacromolecules in vitro and in vivo during the early stage of a biotherapeutic agent discovery remain a major challenge for researchers, especially in the academia setting where resources can be limited.• A simple (enrichment-free), highly sensitive and efficient immunoassay using a capillary-based western system to assess the in vitro stability and pharmacokinetic properties of propitious epitope-tagged recombinant proteins in vivo in mouse to support an early stage development of a lead therapeutic recombinant protein.• The method validation results demonstrated satisfactory characteristics in specificity, linearity, accuracy and precision.• This protocol avoids the need of laborious and costly customized monoclonal antibody as is typically essential for an ELISA or multistep enrichment process which are often indispensable when employing a liquid chromatography–mass spectrometry-based method.• The protocol is capable of quantifying up to 25 samples at the dynamic concentration range from 5 to 200 ng/ml with an LLOQ of the target protein at 0.4 nM (20 ng/ml).方法学的优化，请阅读文章原文

随着全球生物制药行业的日渐繁荣，近几年，中国生物制药呈突飞猛进的增长态势，数以百计的生物制药企业新生力量不断涌现。作为向全球生物制药企业提供创新蛋白质检测技术的新锐品牌，ProteinSimple积极助力全球及中国生物制药的研发和质量控制，iCE（Maurice,iCE3,iCE280)，MFI，Ella等技术已成为相应领域的金标准。iCIEF技术3月6日被药典委员会公布为电荷变异体的检测方法。为了更好的服务中国本土生物制药企业，Bio-techne旗下品牌ProteinSimple，5月22日，5月24日和5月28日，分别在南京威斯汀酒店，上海巴黎春天新世界酒店和北京锦江富园大酒店连续举办了三场用户交流会。国内数十家企业，300多位行业用户参加，数十位行业专家分享了他们的经验。开场篇ProteinSimple大中华区负责人韩爱明先生致开场辞：感谢各位生物制药用户的莅临和指导！本着交流分享，合作共赢的原则，ProteinSimple在未来，将携手中国本土生物制药企业共同谱写中国生物制药的新篇章！ProteinSimple中国区工业销售经理赵维涛先生向所有莅临的生物制药用户介绍了ProteinSimple的历史发展历程和产品的更新历程。大会主持人ProteinSimple中国区市场部经理邓富刚先生，为莅临的生物制药客户，详细介绍了ProteinSimple用于生物制药行业的整体解决方案。技术培训篇ProteinSimple全球首席科学家吴家齐博士，详细为生物制药用户介绍了：iCIEF方法开发的原则及细则，包括再单抗样品，融合蛋白，ADC等不同样品方法开发的特点。并强调了Maurice荧光模块的应用。ProteinSimple应用支持经理杜颖颖博士，为生物制药用户详细介绍了Maurice CE-SDS方法的开发要点及常见问题解析。ProteinSimple 应用科学家刘军和郝玉民博士详细介绍了MFI的工作原理，样品检测要点和结果分析软件。ProteinSimple应用工程师姜国泉、李远志介绍了iCE及MFI日程维护细节，仪器异常判断及解决方案。ProteinSimple市场部的苏倩博士为生物制药用户，详细介绍了用于检测HCPs、PK和ADA的Ella技术平台。客户分享篇中检院重组室李响老师详细介绍了iCIEF方法验证要点。浙江省千人计划专家，浙江大学药学院方伟杰副研究员分享了MFI在生物药研发中的应用。中国计量科学研究院胡志上博士介绍了Correcting biases of light obscuration and MFI measurements：From beads and Protein Particles。先声药业李敏老师为大家分享了基于Maurice开发的案例分析。君实生物的何丽老师分享了iCIEF在生物医药研发中的应用。华兰生物的申志强老师分享了iCIEF检测方法的开发及在融合蛋白类药物开发中的应用。生物制药小编吴文君介绍了全球以及转型中的中国生物医药产业的发展趋势及技术革新趋势。交流篇大会结束后，客户意犹未尽，与我们的首席科学家和应用技术支持进一步交流技术细节。

2019年4月19-20日，2019年第六届中国国际生物药大会在上海滴水湖皇冠假日酒店举行，400多位参会代表参加此次盛会。       Bio-techne旗下品牌ProteinSimple市场部经理邓富刚带来报告：生物大分子药物质量控制的创新技术。

射血分数保留的心衰（(HFpEF)HFpEF是一种血流动力学状态，心脏不能满足机体的循环需求，或者以增加左心室充盈压为代价来满足这种需求，是一个日益严重的公共卫生问题，约占心力衰竭患者住院人数的一半。HFpEF的复杂临床表现源于多种共患病，包括肥胖、高血压和糖尿病。临床资料表明，全身炎症和一氧化氮(NO)水平的失衡对HFpEF的发展至关重要。然而，支持这些概念的明确的实验证据还没有被描述，原因是临床前模型的局限性，未能概括在HFpEF中发现的全部特征。其结果是，基本的病理生理机制仍不清楚，也没有证据为基础的临床治疗为个人提供hfpEF。德克萨斯大学西南医学中心建立临床前模型德克萨斯大学西南医学中心心脏内科，联合约翰霍普金斯心脏内科科学家，最新在最新一期Nature报道了他们的临床前模型：A ‘two-hit’ mouse model of HFpEF，同时具备代谢和高血压应激。高脂饮食和使用Nω-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)抑制组成型一氧化氮合酶。一种未折叠的蛋白反应效应，即X盒结合蛋白1(XBP1s)的剪接形式，在此啮齿动物模型的心肌和HFpEF病人样本中的表达被降低。简单地说，XBP 1的减少是由于诱导型一氧化氮合酶(INOS)活性增加，肌醇的蛋白1α(IRE1α)的S-亚硝基化，XBP 1剪接缺陷。iNOS的药理或遗传抑制，或心肌细胞限制的XBP的过度表达，均能改善HFpEF的表型。基于此模型作者发现iNOS驱动的IREα-XBP1通路调控异常是HFpEF心肌细胞功能障碍的重要机制之一。部分结果two-hit mouse model of HFpEF建立IRE1α–XBP1信号通路研究注：小鼠样本使用传统western blot检测，但是珍贵的人心脏活检样本使用WesCapillary-based immunoassay本文中所有Western blot均提供全膜结果。和传统方法不同，Wes所有实验均为全膜结果，不增加实验成本。Wes系统三大特点微量样本：已被广泛用于分选干细胞，胚胎发育，特定脑区，临床穿刺样本全膜：所有实验全膜结果，且不增加抗体用量定量：化学发光信号值定量欢迎联系ProteinSimple咨询Wes及最新Jess系统。

美国东部时间9月12日，正在美国旧金山召开的CEpharm2018将本年度的大奖颁给ProteinSimple首席科学家，Dr.Jiaqi Wu(吴家齐）以奖励其发明成像毛细管电泳（iCIEF），并将其广泛应用于生物制药/制药领域。

美国东部时间9月12日，正在美国旧金山召开的CEpharm2018将本年度的大奖颁给ProteinSimple首席科学家，Dr.Jiaqi Wu(吴家齐）以奖励其发明成像毛细管电泳（iCIEF），并将其广泛应用于生物制药/制药领域。

2018年7月24日美国硅谷，Bio-techne旗下全球创新蛋白质分析技术品牌ProteinSimple发布新一代Simple western 系统-Jess。

2018年6月2日中国CFDA正式加入人用药品注册技术要求国际协调会（International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use，ICH），中国的药品监管体系已经真正融入国际社会认可的监管体系中了。 在2018年5月24日在国际核心期刊Electrophoresis刊发了文章Interlaboratory Method Validation of icIEF Methodology for Analysis of Monoclonal  Antibodies，完成单位为：中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室，卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室。 研究目的：ICH原则指引下国内8家企业10个实验室iCIEF在治疗用单克隆抗体联合验证Here, for the first time, icIEF technology was validated by 10 laboratories across 8 independent companies using a therapeutic mAb. The parameters of this method validation strictly follow the guideline of the ICH. This guideline includes specificity, precision, accuracy, linearity, range, LOQ and robustness.仪器：10台ProteinSimple iCE310 Units of the iCE3 cIEF Analyzer (ProteinSimple, San Jose, California, U.S.A.). 具体信息，可以阅读原文：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29797663。或咨询ProteinSimple中国：4000-863-973

　　仪器信息网讯 6月8日，全球生命科学试剂耗材供应商Bio-Techne宣布达成协议，收购Quad Technologies公司控股所有股票。交易预计将于7月初结束，Bio-Techne通过手头可用现金进行融资。　　Quad Technologies提供一种新型、可定制、非磁性的Quickgel™技术，可用于细胞分离与活化，开发新的细胞处理工作流程。Quickgel™技术由一种生物可降解聚合物组成，当使用适当的抗体进行功能化时，该聚合物可用于富集特定细胞群，并使用传统表面交联配体活化细胞。成果在CAR-T / TCR和其他基因修饰的细胞疗法过程中具有理想作用，其细胞纯度和功能性的价值很高。　　Quad Technologies成立于2013年，总部位于马萨诸塞州的Woburn，目前拥有近15名员工，专利技术源自Northeastern University。交易达成后，Quad Technologies可享受Bio-Techne提供的使其试剂功能化所需的资源和优质蛋白质。　　Bio-Techne产品线以试剂耗材为主，此前一直耕耘在蛋白分析和细胞分析领域，主要提供细胞因子、抗体及相关试剂盒等产品。近几年Bio-Techne陆续收购ProteinSimple、Advanced Cell Diagnostics，向生命科学、临床诊断、蛋白分析仪器的多元化公司转型。　　此前，Bio-Techne还被美国著名仪器及耗材市场分析杂志 Instrument Business Outlook(IBO)授予“2016年年度公司”荣誉。

全球生物制药行业进入了前所未有的高速增长期，中国生物制药在最近的三年里，同样突飞猛进，每年数以百计的生物制药企业新生力量涌现。作为全球生物制药企业，研发及质量控制蛋白质检测技术的领军企业，proteinsimple积极参与全球及中国生物制药的研发和生产，icief（maurice, ice3), mfi等技术已成为相应领域的金标准。为了更好的服务本土企业，proteinsimple中国，4月28日和5月4日，分别在苏州独墅湖世尊酒店和上海张江长荣桂冠酒店举办了两场用户会。国内数十家企业，近200人参加。proteinsimple 应用支持经理杜颖颖博士，详细的介绍了icief方法开发的细则，及单抗样品，融合蛋白，adc等不同样品方法开发的特点。proteinsimple 应用科学家刘军博士介绍了maurice 软件操作技巧及积分技巧proteinsimple资深应用工程师姜国权介绍了ice及mfi日程维护细节，仪器异常判断及解决方案。同时会议上proteinsimple还介绍了凝胶成像，western blot成像最新 21cfr part 11软件的审计追踪功能。后续proteinsimple还将在北京等地继续举行生物制药行业用户会，精准服务不同区域生物制药行业用户。

“细胞因子风暴”一般情况下叫“细胞因子释放综合症（cytokine release syndrome, crs）。细胞因子风暴通常指大量的细胞因子在短时间内释放，造成人体过度的炎症反应，进而引起机体多器官衰竭，造成严重的不良反应。包括car-t在内免疫细胞治疗是近年兴起的肿瘤免疫治疗的重要方法，将病人免疫细胞体外改造活化后，回输人体，利用免疫反应杀伤肿瘤细胞。因为免疫细胞治疗，会将数以亿计的免疫细胞回输机体，活化的免疫细胞短时间内会释放大量细胞因子，如果不能很好监控，并及采取医疗措施平衡细胞因子水平，将会引起极大的副作用。近年出现的免疫细胞治疗病人死亡案例， 多与此有关。监测crs相关细胞因子crs , 比如gm-csf ,ifn-gamma ,il-1b ,il-2ra/cd25 , il-6 ,il-6ra ,il-10 , il-17a ,mcp-1 ,tnf-alpha，vegf-a，是免疫治疗的重要环节。对于crs细胞因子监测，传统方法为elisa法，存在者众多问题，其中最是：灵敏度不够。 例如作为crs核心调控的细胞因子il-6（emerging evidence implicates il-6 as a central mediator of toxicity in crs，blood, 10 july 2014）.传统elisa的灵敏度大概在15pg/ml。cell 2016年发表文章，20岁-60岁 534个健康人 il-6的表达水平主要分布在0.2pg/ml至2pg/ml，远低于elisa检测水平。而使用il-6抑制剂tocilizuma 是目前临床对于crs病人救治的主要办法。measurement of resting levels of low abundance cytokines such as il-1b, il-6,il-18, and vegf are below the lower limit of quantification by standard elisas in a healthy cohort; therefore, the ella microfluidic analyzer was used to assess cytokine concentrations in the fg/ml to low pg/ml range.cell 167, 1111–1124, november 3, 2016proteinsimple ella超灵敏全自动elisa系统可以很好解决传统elisa存在的灵敏度和一致性差的问题。 alexion pharmaceuticals 2017年也发表了使用ella检测elisa无法检测的临床试验样品。在28例elisa无法获取理想结果的人血清样本中，ella全部获取理想结果。proteinsimple 针对免疫细胞治疗细胞因子风暴检测灵敏度不足问题，基于ella平台推出全套细胞因子检测产品：crp，gm-csf ,ifn-gamma ,il-1b ,il-2ra/cd25 , il-6 ,il-6ra ,il-10 , il-17a ,mcp-1 ,tnf-alpha，vegf-a。产品有三种规格：单因子x 72样本， 4因子x16样本，4因子x32样本。更多资料请联系proteinsimple中国热线： 4000-863-973

裘馨氏肌肉营养不良症（DMD）是一种进行性肌肉变性病，病因是由于基因点突变、缺失，或导致DMD基因的重复，基因转移及蛋白表达缺失等。由于基因突变缺陷导致肌肉细胞不能正常产生一种称为Dystrophin的蛋白质，会使钙离子渗入细胞，引发瀑布反应，导致患者全身肌肉无力，又因肌肉细胞内缺少Dystrophin，导致细胞组织肌肉纤维变得无力且脆弱，经长期的伸展后该缺失肌肉细胞组织将产生机械性伤害..等等因素而破坏，最终导致肌肉细胞死亡。大约65%的病例是经由性染色体隐性遗传而来；35%的病例则由于基因突变而来。因而通过基因编辑可能可以逆转此类疾病。哈佛大学干细胞及生殖医学系Amy J. Wagers教授研究组，2017年在Science发表文章：In vivo gene editing in dystrophic mouse muscle and muscle stem cells。文章中，作者使用(CRISPR)–Cas9编辑技术进行细胞系及小鼠注射基因编辑，发现可以有效逆转，恢复肌纤维基本功能。In this study, we developed and tested a direct gene-editing approach to induce exon deletion and recover dystrophin expression in the mdx mouse model of DMD. Delivery by adeno-associated virus (AAV) of clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)–Cas9 endonucleases coupled with paired guide RNAs flanking the mutated Dmd exon23 resulted in excision of intervening DNA and restored the Dmd reading frame in myofibers, cardiomyocytes, and muscle stem cells after local or systemic delivery.Dystrophin作为研究中的最关键蛋白，则使用ProteinSimple Wes全自动定量蛋白质检测技术来完成。Vinculin为内参蛋白。Dystrophin分子量达427KD，传统western blot需要花费大量时间进行胶，转膜等条件等优化，且很难拿到理想结果。Wes可以全自动完成Dystrophin检测，条带非常干净，无拖尾等，对于准确定量检测极其重要。更多Wes产品应用技术资料，请持续关注ProteinSimple官方微信：

2017年9月13日美国ProteinSimple公司正式全球发布新一代全自动超灵敏微流控ELISA系统Ella。新的Ella系统将可以在90分钟（含样本准备及前处理时间）完成372个ELISA数据点（32样本X4个靶蛋白检测X3重复），同时兼容检测16样本X4个靶蛋白X3重复，72样本X1个靶蛋白X3重复。Ella是ProteinSimple公司推出的全球最快速，最精准，重复性最高的全自动ELISA系统，一经推出风靡全球，被Genentech，pfizer，PRA，PPD，covance等众多制药公司及CRO用于新药临床研究，同时也被NIH，耶鲁，斯坦福大学等用于转化医学，诊断试剂开发，多批次大样本人群筛查等，相关结果发表在Cell等顶级杂志。2016年11月份,Cell杂志封面文章，题目为：Host and Environmental Factors Influencing Individual Human Cytokine Response，作者研究个体及环境因素对人体细胞因子表达的影响，以作为功能人类基因组的重要补充。研究者包括多个世界著名大学及研究机构：荷兰拉德堡德大学医学中心，美国麻省理工学院Broad研究所，美国哈佛大学麻省总医院，美国科罗拉多大学医学院，新加披科技部，挪威奥斯陆大学医院等。研究对象：534名健康志愿者。作为最重要的数据：静息状态细胞因子，表达水平低于传统ELISA检测下限，故研究者采用Ella进行数据采集。 原文阅读：Measurement of resting levels of low abundance cytokines such as IL-1b, IL-6,IL-18, and VEGF are below the lower limit of quantification by standard ELISAs in a healthy cohort; therefore, the Ella microfluidic analyzer was used to assess cytokine concentrations in the fg/mL to low pg/mL range.（Ella）Host and Environmental Factors Influencing Individual Human Cytokine Responses，ter Horst et al., 2016, Cell 167, 1111–1124更多Ella信息，请登陆官网：https://www.proteinsimple.com/ella.html热线电话：4000-863-973

       作为中国医药企业发展促进会会员，ProteinSimple中国（普诺森生物科技（上海）有限公司）携旗下最新系列创新产品参与中国药典委员会预防性生物制品标准与检测技术专项培训班。      7月25-27日，杭州，浙江三立开元名都大酒店。欢迎莅临1号展台，ProteinSimple China展位，考察ProteinSimple疫苗质量控制系列创新产品：       1） Maurice：全自动疫苗等电点分析系统       2） MFI：疫苗制剂颗粒分类计数分析系统       3） Wes：全自动免疫印迹系统       4） Ella：全自动超灵敏ELISA系统，HCP极速标准化检测。

       第七届干细胞年会，将于2017年7月7日至9日在宁夏银川国际交流中心酒店召开。众多干细胞及胚胎发育领域内著名专家参加。       先将会议日程做个分享：       7月7日：青年论坛。      7月8日，9日干细胞大会       作为全球蛋白质研究创新技术领导者，ProteinSimple携旗下四大利器参加本次大会，步入大厅迎面是ProteinSimple的展台No.24号。您将有机会见到干细胞蛋白研究四大神兵：      Wes：微量干细胞，胚胎样本蛋白质表达定量分析系统      Ella： 超敏干细胞分泌性蛋白检测系统      Milo： 干细胞异质性分析系统      Nanopro1000：干细胞蛋白质翻译后修饰图谱研究系统。        剧透至此，欢迎光临2017年第七届干细胞年会，实地考察。

ProteinSimple将整合旗下产品参与7月份众多大型会议：6月29日-7月3日：杭州-华人生物学家大会-ProteinSimple将携带Wes全自动蛋白质分析系统，Ella超灵敏全自动免疫学检测系统，参加本次会议。7月7-9日：银川-全国干细胞年会-ProteinSimple将携带Wes干细胞蛋白质分析系统，Ella超灵敏全自动免疫学检测系统，Milo干细胞异质性分析系统参加本次会议7月25-27日：杭州-国家药典委员会疫苗质量控制专项培训班-ProteinSimple将携带MauriceiCIEF+CE-SDS双功能分析系统，Wes干细胞蛋白质分析系统，Ella超灵敏全自动免疫学检测系统，MFI全自动颗粒计数分类分析系统参加本次会议。