日立：药典明确氨基酸分析检测方法 市场将以15%以上速度增长

近日，国家药监局发布公告，《中国药典》2020年版第一增补本已编制完成，将于3月12日正式实施，此次增补本，在通则和指导原则部分，对多个分析测定方法进行了新增和修订，在药典四部中，新增了9120氨基酸分析指导原则，并对0713脂肪与脂肪油测定法、0832水分测定法、1421灭菌法、2341农药残留量测定法、2351真菌毒素测定法、9001原料药物与制剂稳定性试验指导原则以及9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则等做出修订。

为了全面了解《中国药典》中分析方法的新进展，促进药物检测检测工作的交流与合作，仪器信息网特别发起“《中国药典》分析方法新进展”主题约稿，欢迎各位行业协会/学会、高校/科研院所的专家老师，以及相关仪器厂商们积极投稿。

本文特别邀请日立一起分享，关于氨基酸分析指导原则修订相关内容的解读和解决方案。

问题1: 《中国药典》2020年版第一增补本已编制完成，本次增订，对9120氨基酸分析指导原则有哪些方面的更新？ 与之前的版本相比，该变化对于制药行业或相关用户会带来哪些影响？

目前美国药典、日本药典、欧洲药典等都已经收录了氨基酸分析指导原则，部分药企出口到相应国家的产品也参考这些药典进行氨基酸含量测定或者对原料进行杂质筛查。

我国药典也收录了复方氨基酸注射液、多肽类药物和中药等品种都需要采用适宜的氨基酸分析方法进行质控，但之前药典没有收录氨基酸测定指导原则，此次新增氨基酸分析指导原则明确了药典标准的执行过程中如何选择适宜的方法。

指导原则要求柱前衍生检测通常使用高效液相色谱仪，柱后衍生法检测一般使用商品化的氨基酸分析仪。

指导原则收录了盐酸水解法、碱水解法、氧化水解法、二硫代二乙酸或二硫代二丙酸还原酸水解法、双（1,1-三氟乙酰氧基）碘苯还原酸水解法共计5中样品前处理法。收录了柱前PITC衍生氨基酸测定法、柱前AQC衍生氨基酸测定法、柱前OPA和FMOC衍生氨基酸测定法、柱前DNFB衍生氨基酸测定法、柱后茚三酮衍生氨基酸锂离子交换系统测定法、柱后茚三酮衍生氨基酸钠离子交换系统测定法共计4种柱前衍生法和2种柱后衍生法。

按外标法或内标法以峰面积计算样品中的各种氨基酸含量。

问题2：新标准实施是否会对相关仪器市场产生拉动？预估市场变化规模有多大？

根据相关市场预测，从2020年到2025年，氨基酸分析仪市场每年大概增长10%左右，新的指导原则的实施将有助于药厂明确产品检测方法，有助于产生新的氨基酸分析仪的采购需求，市场需求大概以15%以上的速度增长。

2022年日立LA8080高速氨基酸分析仪销售台数实现了超30%大幅增长了，2023年在2022年高速增长的基础上销售台数又实现了双位数增长，同时日立Chromaster全功能氨基酸分析仪销售台数也相应的快速增长。

问题3：目前贵公司在氨基酸检测方面有哪些特色的应用方案或仪器产品？具有怎样的技术优势？

针对氨基酸检测，日立科学仪器（北京）有限公司可以提供指导原则所列的柱前衍生和柱后衍生两种不同的方案，方便药企和药检所根据实际需求选择。

1、日立日立Chromaster高效液相色谱仪柱前衍生法

日立Chromaster高效液相色谱仪可以根据用户的实际需求提供灵活的配置：

• 10 ml/min双柱塞串联往复泵可以选择40 Mpa或60 Mpa

• 紫外可见检测器、荧光检测器、DAD检测器等

• 可选配衍生单元进行柱后茚三酮法检测。

• 标配第1代700-1500cm的反应盘管衍生技术

日立Chromaster全功能氨基酸分析仪

以下是使用日立日立Chromaster高效液相色谱仪部分测试示例：

1.1、PITC法柱前衍生测氨基酸

1.2、依据日本药典测定Val/Ile/Leu样品

1.3、测定乙酰半胱氨酸

1.4 选配柱后衍生单元后，可以进行柱后茚三酮法测定氨基酸

2、日立LA8080高速氨基酸分析仪柱后衍生法

日立LA8080高速氨基酸分析仪

日立公司也提供LA8080高速氨基酸分析仪测定方法，主要配置：

• 1 ml/min双柱塞串联往复半微量泵

• 3µm高理论塔板数阳离子交换树脂色谱柱

• 全自动色谱柱自行装填程序

• 光栅分光检测器

• 高压全体积直接进样

• 衍生单元提供3种方式可选（第3.5衍生技术灵敏度最高，使用寿命最长）：

研发于1997年的第2代反应柱

研发于2011年第3代TDE2

研发于2017年第3.5代TDE3

（研发于1962年的第1代700-1500cm反应盘管技术可供对检测结果准确性要求不高的用户选配）

日立LA8080高速氨基酸分析仪可选配色谱柱全自动自行装填程序，可实现用户自行装填色谱柱，且柱效可达到原厂色谱柱柱效。

以下是使用日立LA8080高速氨基酸分析仪测定样品的示例：

2.1、18AA-II复方氨基酸注射中氨基酸测定

样品测定难度在于Cys含量非常低，非常考验仪器灵敏度和噪音，LA8080噪音值验收承诺小于25 µV，实测噪音值会比25 µV更小，针对这种含量差异非常大的样品检测对低含量氨基酸检测结果更准确。

在前几年的抽检中，在被抽检到的药企中，使用日立LA8080的药企都顺利的通过了抽检，部分抽检未通过的药企重新采购了1-5台日立LA8080。

2.2、根据指导原则，部分药企可能会选内标法测定氨基酸，日立LA8080可提供正亮氨酸和正缬氨酸做内标两种方法。

2.2.1 正亮氨酸（Nle）做内标

正亮氨酸做内标标准分析法

仅需要通过调整分析程序即可获得更大分离度

正亮氨酸做内标高分离分析法

2.2.2 正缬氨酸（Nval）做内标

可以在30分钟内实现包含CySO3H/MetSON/Orn/Hypro等氨基酸在内的25种氨基酸分析

2.3、指导原则提到“在蛋白质或多肽水解之前，用过氧甲酸氧化样品中的半胱氨酸或胱氨酸和甲硫氨酸，使其转化为稳定的磺基丙氨酸和甲硫氨酸砜，防止半胱氨酸或胱氨酸和甲硫氨酸在水解过程中被破坏”，日立LA8080提供含硫氨基酸测定标准分析和快速分析两种方法。

2.3.1 含硫氨基酸标准分析法：

2.3.2 含硫酸氨基酸快速分析法：

2.4、含丙氨酰谷氨酰胺复方氨基酸注射液的测定，日立LA8080可提供更加多样化的分析方法，仅需调整分析方法即可实现不同目的的测定需求，显示出LA8080洗脱模式的优异性。

2.4.1标准60 mm色谱柱的标准分析法

2.4.2、标准60 mm色谱柱的快速分析法，仅需要调整分析程序即可

2.4.3标准60 mm色谱柱的高分离分析法，仅需要调整分析程序即可

2.4.3、80 mm色谱柱的标准高分离分析法

2.5、复方氨基酸注射液中氨基酸测定

2.6、复方氨基酸注射液中氨基酸测定

2.7、脑蛋白水解氨基酸测定

2.8、3-氨基丙醇测定

2.9、有关物质筛查

2.9.1 SST

2.9.2 原料

如果LA8080色谱柱柱效下降后，可以使用全自动色谱柱装填程序实现一键式自行装填。

进口色谱柱对照品图谱

自行装填色谱柱对照品图谱

通过比较对照品图谱，可以发现LA8080自行装填色谱柱柱效可以达到甚至优于进口色谱柱的柱效。

综上，日立公司不仅可以提供指导原则所列柱前衍生法测定方案，也可以提供灵活多样的柱后衍生测定方案，更多的分析示例和方法请联系日立科学仪器（北京）有限公司。