您好,欢迎访问仪器信息网
注册
MP Biomedicals (Shanghai) Co.,Ltd. 安倍医疗器械贸易(上海)有限公司

关注

已关注

已认证

粉丝量 0

当前位置: MP中国 > 最新动态 > 【MP课堂】磁珠法粪便提取试剂盒操作开讲,这些细节你注意到了吗

【MP课堂】磁珠法粪便提取试剂盒操作开讲,这些细节你注意到了吗

MP中国

2021/01/07 12:55

阅读:134

分享:

常规样本的核酸提取

想必已不再是实验党们头疼的对象了吧

然鹅,粪便基因组DNA提取步骤实在繁琐

还可能遇到提取浓度低,纯度差等问题

简直天崩地裂啊

没关系,这点小事MP帮你解决!

拿好这份指南

让你的粪便DNA提取实验事半功倍


 【 一图了解提取步骤 】


【 PART 01-预洗 】

预洗是杂质去除的关键步骤,由于粪便样本中可能含有多种可溶性杂质,如胆红素、胆汁盐、腐殖酸、植物源性多糖等。对于成分复杂的粪便样本,倘若不进行预洗,这些杂质会在细胞及菌体裂解后,混合在释放的核酸中,并与核酸竞争性结合磁珠,杂质与磁珠结合后,在洗脱时与磁珠分离,导致洗脱的DNA有颜色,纯度低。

预洗操作

1.向Lysing Matrix E管中加入样本,再加入1mL Pre-wash Buffer,用涡旋震荡仪涡旋至粪便样本被完全重悬起来。

2.因粪便状态而异,涡旋时间控制在1min以内,时间过长会导致一部分细胞或菌体破裂,损失一部分DNA。

3.12000rpm,离心5min,弃去上清,保留沉淀。


除了按照预洗操作执行以外,对于各类型的样本也会有不同注意事项:


【 PART 02-裂解与去杂 】

裂解:样本预洗后,向Lysing Matrix E中依次加入裂解液的三种成分:Lysis Buffer F1、Lysis Buffer F2、RNase A,涡旋混匀。
使用FastPrep-24TM 5G研磨仪5 m/s,研磨40s或用涡旋震荡仪以最大速度涡旋10 min,离心后保留上清液,弃去沉淀。

去杂质:将上清液转移到新的离心管中,添加去杂剂:PPS,主要用于去除蛋白等杂质。在4℃放置5 min能提高效果,离心后,保留上清液,弃去沉淀。

【 PART 03-结合-漂洗-洗脱 】

图 |磁珠法提取

这三个步骤可以手工操作,也可以配合自动化核酸提取仪实现自动化批量操作。一般来说,手工提取预计在40-45 min左右完成,采用MP公司的24孔磁力架(货号 116570413),可以一次处理24个样本。而采用自动化仪器提取,随着样本数量的增加,操作时间并不延长,样品处理量成倍增加,效率大大提高,从此解放双手。


图 |24孔磁力架

手工操作





自动化操作
1. 将400 µL上清液转移至 96 孔板从左至右的第二列中,并按照下表在各添加其他试剂。 


2. 按照下表设置程序,运行自动化核酸提取仪。


【 订购信息 】


如有任何技术问题,欢迎来电咨询400-1500-680或添加官方微信:MPBiomedicalsSH,我们可以根据您的实验需求,提供定制化解决方案~

推荐产品
供应产品

MP Biomedicals (Shanghai) Co.,Ltd. 安倍医疗器械贸易(上海)有限公司

沟通底价

提交后,商家将派代表为您专人服务

获取验证码

{{maxedution}}s后重新发送

获取多家报价,选型效率提升30%
提交留言
点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》 且同意关注厂商展位
联系方式:

公司名称: MP Biomedicals中国

公司地址: 上海市浦东新区金海路1000号金领之都6号楼202 联系人: 冯鑫 邮编: 201201

仪器信息网APP

展位手机站