三种现象暗示色谱柱该“退休”

三种现象暗示色谱柱该“退休” 色谱柱是用在色谱仪分离试验中将多组分样品分离为单个组分的仪器，它是色谱分离系统的核心。色谱柱分为填充柱和毛细管柱两类，具有柱效高、选择性好，分析速度快等特点。色谱柱进行长期的分离检测操作之后，可能会出现检测速度下降的现象，那么碰到这样的问题，是否就该考虑更换色谱柱了呢？ 检测色谱柱分离效率主要看三个参数：理论塔板数、分辨率、峰形。 理论塔板数是用于定量表示色谱柱的分离效率参数之一（简称柱效）。柱效取决于固定相的种类、色谱的柱效性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。塔板数是一个粗略的指标，不能作为评价色谱柱的标准。通常使用塔板数来考察色谱系统：将新柱子接到仪器上，根据色谱柱生产商提供的测试条件测试该色谱柱，你应该得到和分析报告上同样的结果。最差也应该得到比报告值低10%的塔板数。如果你所测得的塔板数远远低于厂家提供的报告数据，这就说明你的色谱系统可能存在一些问题。进样器、柱外效应、毛细连接以及检测器都是容易出现问题的地方。 分辨率是我们考察色谱柱的一个非常重要的指标，只要两个组分可以获得基线分离，对该分析物的定量就不会有什么问题。对于对称的高斯峰来讲，1.5的分辨率即可得到基线分离;若Rs在1.7至2.0之间则更好。若峰拖尾严重则需要更高的分辨率。使用分辨率作为色谱柱的评价指标的好处在于我们可以直观地看到相邻的峰的分离情况。 另外一个考察色谱柱质量的标准是峰形拖尾情况，厂家测试报告的峰形都非常漂亮，但这并不代表该色谱柱分析实际样品的情况。实际样品中总是含有或多或少引起峰形拖尾的组分。最值得一提的是含有氮原子的化合物，这些化合物和硅胶骨架上的游离硅羟基结合非常紧密，随着色谱柱使用时间越长，键合相流失，拖尾则更加严重。然而拖尾情况的改变不像分辨率的改变那样能够马上看出来。基于此，最好定一个拖尾因子的上限，如美国药典规定拖尾因子不超过1.8。 较好的方法是使用压力、分辨率和峰形的混合指标来考察一根色谱柱的状态。压力的测量是最容易的，通常我们确定的色谱方法要满足以下的要求：用新柱子时柱压不高于2500psi，在任何情况下压力都不超过3000psi。尽管现代的液相色谱仪系统都可在更高的压力下使用，但由于高压产生的系统损耗和泄漏的问题会很严重。当压力超过3000psi时，考虑更换进样器和色谱柱之间的0.5mm孔径的在线滤片。如果更换滤片后压力仍然高，则色谱柱的滤片或者是色谱柱已经被污染，这提示我们该换柱子了。有统计表明，超过60%的色谱柱损坏是由于压力过高的原因。 我们的经验是，在日常使用气相色谱仪或者液相色谱仪进行分离实验时，根据样品的使用要求，通过分析足够多的实际样品，了解色谱柱分离效果变差的时候是什么样的情况，从而确定色谱柱“抛弃”标准。 本文地址：www.hxsj17.com