上海沛欧定氮仪和消化炉检测辣木叶提取物中的蛋白质含量

      上海沛欧定氮仪和消化炉检测辣木叶提取物中的蛋白质含量

摘要：采用凯氏法测辣木叶提取物中的蛋白质含量是国标推荐方法。

关键词：沛欧全自动定氮仪、消化炉、辣木叶蛋白质含量

引言：辣木叶为辣木科辣木属植物的树叶，可食用，其营养价值非常丰富，含有大量的蛋白质、氨基酸、纤维素及矿物质，具有降血糖、降脂、降压、抗肿瘤、抗氧化、通便、利尿、改善睡眠等功效，长期食用可增强人体免疫功能，延缓衰老、预防疾病，其蛋白质的含量直接影响辣木叶的品质和营养功效，因此对辣木叶提取物蛋白质含量的测定具有重要的意义。为此我们使用沛欧全自动定氮仪SKD-1000（采用通用的颜色法判断、具有多项技术）红外石英消化炉SKD-20S2对辣木叶提取物进行蛋白质检测。

前言:按GB2009.5-2016食品安全国家标准 《食品中蛋白质的测定》要求测试。

参考文献：GB2009.5-2016

一、原理

辣木叶提取物样品在浓硫酸和硫酸铜、硫酸钾高温下，把有机的细胞结构破坏，把氮元素氧化成硫酸铵，（为了使得样品消化时不产生挂壁，必须采用样品孔间温差小和带程序升温功能的消化炉，否则会产生挂壁现象，导致消化失败）消化完成后，需要将样品冷却到40℃左右，再把消化管放入定氮仪上。消化管内自动添加稀释液、碱，反应杯内自动添加硼酸和显色剂。对消化管内样品加热逸出氨气和水蒸气混合液，冷却流到反应杯内，同时用标准盐酸进行滴定，直到蒸馏结束和滴定到终点。计量消耗标准盐酸的体积即可计算辣木叶提取物中蛋白质含量。

二、仪器和设备

1. 全自动定氮仪SKD-1000（上海沛欧分析仪器有限公司）

2. 消化炉SKD-20S2（上海沛欧分析仪器有限公司）

3. 万分之一天平

4. 滴管移液器

5.烘箱

三、试剂、样品和标准品

1. 标准盐酸浓度：0.1114 mol/L

2. 40%的氢氧化钠

3. 2%的硼酸+甲基红和嗅甲酚绿混合的显色剂（1:3.5）

4. 催化剂（硫酸铜:硫酸钾为1:10的混合物）

5. 蒸馏水

6. 样品：辣木叶提取物20201001

7. 硫酸铵 

四、操作条件和程序

1. 样品制备

用分析天平依次称取2个空白，称样量为：①0.4082 g硫酸铜、3.6037 g硫酸钾；②0.4045 g硫酸铜、3.6049 g硫酸钾，5个辣木叶提取物待测样品，称样量为：①0.4061 g硫酸铜、3.6010 g硫酸钾、0.4058 g辣木叶提取物；②0.4048 g硫酸铜、3.6035 g硫酸钾、0.4037 g辣木叶提取物；③0.4097 g硫酸铜、3.6060 g硫酸钾、0.4032 g辣木叶提取物；④0.4069 g硫酸铜、3.6018 g硫酸钾、0.4096 g辣木叶提取物；⑤0.4047 g硫酸铜、3.6009 g硫酸钾、0.4011 g辣木叶提取物，将称量好的空白与样品分别置于标号的消化管中，依次向每个消化管中加入10 mL硫酸。

2. 样品消化及消化炉参数设置

将制备好的空白及样品按序号放入消化炉，盖上排废气装置，打开抽气泵上水龙头开关（前三个阶段水流要大，使释放出大量废气能及时排除，第四阶段水流开小以避免酸雾排出），然后进行消化炉温度-时间曲线参数设置：135度（20分钟）--190度（25分钟）---350度（5分钟）----400度（70分钟），消化炉根据时间-温度曲线自动升温和保温，直到消化结束。把消化架取下放在冷却架上，冷却到40 ℃左右。

3.凯氏定氮仪仪器回收率测定

用分析天平精密称量已烘干的硫酸铵（125 ℃烘箱烘2h）2份，称样量为：0.1041 g、0.115 g，分别置于标号的消化管中，然后在凯氏定氮仪仪器上进行测定参数设置进行测定，参数设置为：碱10 mL、稀释液20 mL、样品0.1041g和0.115g、滴定酸为盐酸、标准酸浓度为0.1114 mol/L、定时6 min、系数1、名称硫酸铵1和硫酸铵2，参数设置完毕后，点击屏幕上的测试程序中的调取，点击样品测试选项即可进行测试，测试完毕后查看两次平行测定的含氮和消耗酸的数据是否正常，依次来判定该仪器运行是否正常。

4.凯氏定氮仪参数设置

  打开凯氏定氮仪显示屏，点击参数设置，依次输入碱45 mL、稀释液40mL、样品克数、标准酸浓度0.11414 mol/L、定时6 min、样品名称、系数6.25，总共测5个样品，因此要依次设置5次，一并保存，即可自动测定。

5.样品蛋白质测定

  参数设置完后，便可将对应标号的空白和样品的消化管接到仪器对应位置，先测空白，再依次测样，测定数据依次自动保存在仪器硬件盘中，测完查询记录即可。

6.计算公式

蛋白质含量计算公式x%=6.38×1.401(v-v0)c/m

氮含量计算公式y%=1.401(v-v0)c/m

x%---------蛋白质含量

y%---------氮含量

v--------消耗标准酸体积（ml)

V0------空白消化标准酸体积(ml)

C--------标准酸浓度（mol/L)

m--------样品质量(ｇ)

质控品采用烘干的分析纯（99%）硫酸氨，硫酸铵理论含氮量21.21%

结果分析:本次测试数据符合要求，数据可靠。

附：5009.5-2016《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》

‍注意事项：

辣木叶提取物在取样时注意均匀性，在消化样品时，尤其是含糖、油脂的样品容易起泡产生样品挂壁，这时消化炉要有程序升温功能，孔间温差要小，避免样品温差所产生的升温不协调而使样品挂壁。

定氮仪要有足够大的蒸馏功率，以便尽可能蒸馏出氨气，提升回收率。如果全自动定氮仪则采用颜色法终点判断的方法，保障数据准确性和仪器的线性度。