黄曲霉毒素是毒性最大的一类霉菌毒素,主要污染粮油食品、动植物食品、饲料等。目前已分离出20余种黄曲霉毒素衍生物,常见的有 b1、b2、g1、g2、m1、m2。其中以 afb1 的毒性最大,致癌性最强。(发霉的食物一定不能吃)
奶牛吃了发霉的饲料(含黄曲霉毒素 b1),经体内代谢转化为黄曲霉毒素 m1(afm1)。这就是牛奶中 afm1 的来源。
afm1 相对稳定,牛奶常见的消毒方法对其无可奈何。它的毒性仅次于 afb1,主要表现在致癌性和致突变性。欧盟规定成人牛奶及奶制品中的 afm1 含量不得超过 0.05 μg/kg(0.05 ppb)、婴幼儿奶制品中允许含量再降一半。
传统方法如 tlc、elisa、hplc、lc-ms 等被广泛用于检测牛奶中的 afm1。然而,由于大量快筛样本的增加,开发高通量定量方法至关重要。
原位质谱无需或仅需简单样品制备,可于常温常压下对样品直接原位采样,快速进行原位分析(参考:dart 测定玉米和牛奶中的黄曲霉毒素)。(点击链接)
ap-maldi 大气压基质辅助激光解吸电离-原位质谱法同样能迎接超高通量分析需求的挑战,并能进一步绘制黄曲霉毒素及其代谢物的空间分布(质谱成像 msi)。
vishal mahale 等人使用 ap-maldi 建立了一套高通量、快速定量分析牛奶中 afm1 的原位质谱方法,应用于食品监管机构和乳制品行业实验室。该法仅需简单的样品前处理即可获得可靠的定量分析结果。
实验方法:制备标准溶液和基质。牛奶样品用水稀释,免疫亲和柱(iac)净化。ap-maldi 离子源耦合 qtrap 5500 串联质谱仪定量分析;同时,以 uhplc-fld 法进行了方法比较和结果验证。
ap-maldi srm 分析
图1、ap-maldi 靶板示意图,包含标准液、基质匹配校准液、质量控制(qc)样品、牛奶样品。
图2、afm1 的标准溶液校准模型,(a)q1/q3,srm-329.1/273.1;(b)q1/q3,srm-329.1/229.2,浓度范围 0.02-50 ppb,0.02-10 ppb。
图3、afm1 的基质匹配校准模型,(a)q1/q3、srm-329.1/273.1,(b)q1/q3、srm-329.1/229.2,浓度范围 0.01-25 ppb,0.01-10 ppb。
每份样品的分析时间<1分钟。在 srm 检测模式中监测到 afm1 在 273.1 u 和 229.2 u 的定性子离子峰。ap-maldi srm 方法在所选浓度范围内校准曲线有良好的线性关系,r2=0.99,样品回收率良好(97-106%)。
使用 uhplc-fld 方法对 afm1 定量,验证了 ap-maldi srm 方法的有效性。与已有旧方法相比,新的 ap-maldi srm 方法具有良好的特异性和灵敏度,又可进行(传统方法达不到的)超高通量检测。
研究表明
ap-maldi 偶联 “选择离子反应监测(srm)”可快速定量分析检测牛奶中的黄曲霉毒素 afm1。与常规的耗时冗繁技术相比,新方案大大减少了分析时间,可用于大队列和多批次牛奶样品的筛查。
该法可靠、灵敏度高,符合国际监管机构要求,特异性与已验证的 lc-ms/ms 液质方法一致。同时,ap-maldi srm 也适于研究生物组织中黄曲霉毒素的空间定量成像,用于食品检测和临床研究。
● 参考文献:
vishal mahale, madhuri gupta, manisha dhanshetty, et al. rapid and quantitative analysis of aflatoxin m1 from milk using atmospheric pressure—matrix assisted laser desorption/ionization (ap-maldi)-triple quadrupole selected reaction monitoring, journal of aoac international, 2022, 1-8
https://doi.org/10.1093/jaoacint/qsac012
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文章来源:华质泰科服务平台 微信公众号
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