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中药也可以医治动物吗?

Revvity

2023/03/28 13:18

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随着新冠病毒近几年的肆虐,科学家们也针对新冠病毒研究策略研究技术提出了多种有效的方案,为新冠的新药研究提供了很好的工具。同时,随之发展出来的新技术和研究策略也并不是仅仅可以用到人的身上,而对于动物病毒的基础研究和药物开发也同样适用。


猪繁殖和呼吸综合征(PRRS),是影响经济效益的主要猪病之一,自1980年代以来已经严重了全球养猪业。PRRS病毒(PRRSV)是PRRS的病原体,是一种包膜正链RNA病毒,尽管已经为控制和预防PRRS做出了大量努力,但市售疫苗的疗效有限,这主要是由于PRRSV的免疫抑制特性、PRRSV基因组的高度遗传多样性以及PRRSV感染期间称为抗体依赖性增强(ADE)的现象。因此,迫切需要开发针对PRRSV的新型抗病毒药物。


而新冠的整个治疗方案完善过程中,中药已逐渐成为有前途的抗病毒药的重要来源。因此,抗动物病毒药物也可以从中药出发进行研究。中药衍生的生物活性成分,如黄酮、生物碱和萜类化合物,已被证明通过多种机制对PRRSV发挥抗病毒活性。



血根碱是一种生物碱,可以从许多植物中分离出来,包括马齿苋、白芷、罂粟和加拿大血红。血根碱的抗炎、抗肿瘤和抗菌特性已被广泛报道。然而,其抗病毒活性很少见报道,仅观察到血根碱对烟草花叶病毒(TMV)的抗病毒作用中等。


华中农业大学兽医院和微生物国家重点实验室团队,通过靶向病毒感染的多个阶段(包括内化、复制和释放过程)对PRRSV的增殖进行有效的抗病毒作用研究。


首先,为了确定后续实验中血根碱的浓度,评估了血根碱对MARC-145细胞的细胞毒性。血根碱50%细胞毒性浓度(CC50)为3.27μg/mL,当浓度低于0.8 μg/mL时,血根碱对MARC-80细胞无明显细胞毒性。该实验是通过化学发光的方法监测细胞活性,而监测设备则是Microbeta液体闪烁计数仪。MicroBeta液体闪烁计数仪通常印象中是同位素检测筛选方案的金标准,然而它其实也是一款超灵敏的化学发光检测仪器。


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随后,为了进一步验证血根碱对PRRSV感染的抑制作用,用不同剂量的血根碱处理MARC-145细胞并感染PRRSV-GFP(表达绿色荧光蛋白的PRRSV)24小时。如图所示,与DMSO治疗组相比,血根碱以剂量依赖性方式显着降低了PRRSV的感染率。同样,血根碱对PRRSV的滴度、蛋白表达水平(nsp2和N)和基因组/亚基因组RNA水平(nsp9和ORF7)的剂量依赖性抑制作用也得到证实。


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随后在机制上,通过网络药理学和分子对接,将ALB、AR、MAPK8、MAPK14、IGF1、GSK3B、PTGS2和NOS2确定为血根碱的潜在抗PRRSV靶点。


此外,由于中药多为复方,因此考虑是否可以通过多种类型药物联合使用提高效果。白屈黄碱是从Macleaya cordata获得的另一种关键的生物活性生物碱。本文还初步探讨了白屈黄碱对PRRSV感染的影响,以剂量依赖性方式显着下调PRRSV-GFP的感染率。进一步探讨了血根碱-白屈黄碱组合的抗病毒作用。MARC-145细胞用不同浓度的混合物处理,以血根碱和白屈黄碱(2:1)为主要活性成分,以下简称为BE60。细胞毒性测定结果显示,BE60的CC50浓度为3.30μg/mL,浓度低于1.60μg/mL的BE60对MARC-145细胞无明显的细胞毒性。然后,测试BE60在不同浓度下的抗病毒潜力,结果表明BE60剂量依赖性抑制PRRSV-GFP感染,当用BE60以最高安全浓度(1.60μg/mL)处理时未观察到PRRSV感染细胞。值得注意的是,PRRSV感染的细胞仍然存在于以最高安全浓度单独用血根碱或白屈黄碱处理的组中。上述数据表明,血根碱和白藓素之间的组合似乎很有希望,抗PRRSV活性增加。


在这些抗感染的研究过程中,设计到大量不同浓度,不同组合的样品,因此,研究人员利用湖北第一台opera phenix激光共聚焦高内涵筛选系统对感染效率进行评价,极大的提高了相关的研究效率。


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通过本项研究,不仅仅评价了两种中药有效成分的抗病毒效果,而且建立了相关的筛选和评价实验方案以及联合用药的策略,为后续以价格低廉,副作用低的中药为基础的兽药研发提供了思路。


参考文献


Qiyun Ke et al, Sanguinarine Exhibits Antiviral Activity against Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus via Multisite Inhibition Mechanisms, Viruses 2023, 15(3), 688。


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