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液相色谱法检测氟苯尼考制剂中非法添加试剂的含量
2016/04/12 10:51
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方案摘要：
产品配置单：
科捷仪器LC600C 梯度液相色谱仪
型号： KJ LC600C
产地： 江苏
品牌： 南京科捷
¥10万 - 20万
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方案详情：
氟苯尼考（Florfenicol）又名弗洛芬，是在八十年代后期成功研制的一种新的兽医专用氯霉素类的广谱抗菌药。氟苯尼考属于抗生素类药物，作用机理是通过抑制肽酰基转移酶活性而产生广谱抑菌作用。作用范围包括各种革兰氏阳性、阴性菌和支原体等，敏感菌包括牛、猪的嗜血杆菌、痢疾志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、肺炎球菌、流感杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌、衣原体、钩端螺旋体，立克次氏体等。氟苯尼考被用作动物专用抗菌药，家禽、家畜及水产类的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显著。
在市场上，有不少的氟苯尼考制剂被曝非法掺入了烟酰胺和氨茶碱，此行为不但违反法律扰乱兽药市场，同时也为动物类食品药品的安全问题埋下隐患。寻找快速、有效、准确的分析方法对检测氟苯尼考中非法添加的物质，从而达到监控兽药市场合法、安全的质量监督作用，是至关重要的。
首先，我们通过资料查阅确定，采用液相色谱法（PAD）测定氟苯尼考中烟酰胺和氯茶碱含量，该方法具有专属性，氟苯尼考不会对待测物产生干扰；耐用性，柱温、PH、色谱柱要求对待测物的分离度影响都不大。这种方法检测限低、准确度高。
实验中选用了LC-600A智能全控高效液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司），LC-600A由高压恒流泵与紫外检测器直接构成分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等，具备多元高压洗脱、波长扫描等功能。
样品处理：本实验所测样品属模拟样品，即20%氟苯尼考粉末，按1%添加烟酰胺和氨茶碱，混匀。准确称取样品1.0g于量瓶中，加15%甲醇溶液适量，超声处理15min，冷却后加15%甲醇溶液定容至刻度，待测。
仪器条件：
| 色谱柱 | 十八烷基硅烷键合硅胶填充柱 |
| 流动相 | A：0.1%甲酸溶液（三乙胺调节PH=3.0） B：甲醇 |
| 洗脱程序 | 见下表 |
| 检测器 | PDA（二极管阵列检测器） |
| 波长范围 | 210nm~400nm，分辨率为1.2nm，记录261nm波长处色谱图 |
洗脱程序设置：
| 时间/min | 流动相A/% | 流动相B/% |
| 0 | 85 | 15 |
| 1 | 85 | 15 |
| 8 | 55 | 45 |
| 10 | 55 | 45 |
| 13 | 85 | 15 |
| 15 | 85 | 15 |
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