COLD-PCR和高分辨率溶解结合使用，高效的筛查和鉴定癌症基因低水平的未知突变

2010-12-16 10:13

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资料摘要：

癌症中体细胞分子层面的突变，常常需要在大量野生型DNA中辨识低浓度的DNA突变。但是，突变检测方法的选择率和灵敏度常常限制了鉴定低浓度突变的可靠性。最近开发的COLD-PCR（低变性温度下的复合扩增，李等人。2008）解决了低含量基因突变检测的一些局限性，在PCR扩增过程中利用关键变性温度丰富含有突变的扩增子，不论突变位于序列的什么地方。COLD-PCR的一个主要属性是富集突变体以便于在PCR后的直接测序。然而碱基测序仍然是昂贵的选择，从而通过高通量扫描序列预检是有吸引力的办法。高分辨率融解（HRM）是一种可用于预筛查测序之前未知突变的技术，但不能确定具体的检测基因突变的身份。因此，为了富集、快速筛查和鉴定低浓度的未知突变，我们把HRM突变扫描和COLD-PCR相结合，随后进行已知突变的直接测序鉴定。

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