超临界流体色谱在萜类化合物分离分析中的应用进展

脂肪酸和甘油酯均拥有较长的烃链，不溶于水，都是弱极性成分。常用GC法分析脂肪酸，但GC法样品需要衍生化，前处理过程复杂。而SFC分析脂肪酸时无需进行衍生化处理，方法简单。林春花等建立了UPC2-MS方法快速分析棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸5种常见脂肪酸的方法，并且成功应用于玉米油、葵花籽油、橄榄油、茶油、大豆油和花生油中常见脂肪酸[1] 以及工业油酸中5种脂肪酸的含量测定[2] ；文中采用ACQUITY UPC2 BEH 2-EP色谱柱，以甲醇-乙腈(1:1，v/v)为改性剂，梯度洗脱，在电喷雾负离子模式下进行检测，外标法定量，在3 min内完成了各样品中脂肪酸的含量测定。

已有的分析甘油酯的方法有HPLC法和银离子色谱法。HPLC法使用非水的流动相进行洗脱，分析时间长，等度洗脱时间需近300 min，梯度洗脱时间仍需140 min [3-4] ；银离子色谱法分析甘油酯时所需的柱平衡时间长，峰形差，重现性差[5]。甘油酯类化合物的同分异构体较多，尤其是双键位置异构的甘油酯异构体分离难度大。而利用SFC分析甘油酯时分析时间短，分离效果好，异构体也能得到有效的分离。Lesellier等[6]采用4根Kinetex C18(150mm×4.6 mm，2.6μm)柱串联15cm的Accucore C18色谱柱，乙腈-甲醇(90:10，v/v)为改性剂，在60min内分析了坚果油和油菜籽油样品并很好地分离样品中的酰基甘油对映体。Lee等[7]利用SFC-MS采用C30色谱柱YMC carotenoid柱，含0.1% 甲酸铵盐的甲醇为改性剂进行梯度洗脱，较好地分离了食用油样品中的甘油酯同分异构体。Ashraf-Khorassani等[8]利用SFC-MS以ACQUITY UPC2 HSS C18 SB(150mm×3.0mm，1.8μm)柱为分析柱，乙腈为改性剂，2%～20% 乙腈的洗脱梯度，快速分析了大豆油、玉米油、芝麻油及西红柿籽油样品中的三酰基甘油成分，并能检测样品中的微量杂质，为纯化工艺的优化提供依据。虽然Lesellier， Lee和Ashraf-Khorassani采用SFC分析甘油酯时所用的色谱柱柱长、粒径和种类均不相同，但是选择的色谱柱都是长链烷基键合固定相，有较高的碳含量和较好的疏水性。除色谱柱外，流动相中改性剂的种类和比例对甘油酯的保留和分离也有较大的影响。因此，色谱柱的选择和流动相的优化都SFC能够较好地分析甘油酯的关键。

SFC不仅可以单独分析脂肪酸和甘油酯类成分，还能和HPLC串联成二维色谱完成对复杂样品的分析。Frangois等[9]采用在线SFC×HPLC二维色谱成功地分析了鱼油样品中的脂肪酸类成分，并与HPLC×HPLC色谱进行了对比。HPLC×HPLC色谱的峰容量(90)明显小于SFC×HPLC色谱的峰容量 (550)。由此可见，SFC×HPLC二维色谱的正交性更强，互补性更好，优势更加明显。Frangois等[10]还采用了离线SFC×HPLC二维色谱分析了鱼油样品中复杂的甘油酯类成分，并且有效地分离了甘油酯同分异构体。 Gao等[11]利用HPLC X SFC二维色谱分析了灵芝子实体中低极性化合物(如脂肪酸等)。