样品无法重结晶到底该怎么办?

重结晶的困扰，已经是老生常谈，但是每天都有不同版本不断上演。

小编是木虫老粉，毕业十年，还会偶尔在论坛里闲逛，最近关注重结晶问题，顺手搜了一下，不搜不知道，恰好有438个帖子，关键词多是“无法重结晶”、“结晶不出来”、“反复重结晶”、“无法去掉类似结构杂质”、“除不掉的杂峰”等等。下边是小木虫一个典型帖，和大家分享合成中常遇到的一种情况，一同想想该怎么办。

请教重结晶析不出来怎么办？

在做一个中间体，文献说是用异丙醇析晶，但基本上看不到什么固体。又试了很多溶剂都析晶不是很好，混合溶剂要么不出固体，要么分层。连DMF都加了（产物应该连DMF也不溶），但只是有些颗粒悬浮在溶液中，很少，又聚集不下来。

我的东西是油状的，但纯的产品应该白色固体；点板产物下方有个淡点，估计杂质是油油的，但怎么才能除去这个杂质呢？

我还试过加入很多溶剂放冰箱冷藏，还加过乙醚置通风橱里自然挥发，还加过活性炭，都不行。快郁闷死了，哪位高手有好的建议？

以下是虫友们的热情支招：

01 小虫虫5228

我不知道你中间体用什么溶剂，要是吡啶就坏了，说明里面有吡啶，就形不成晶体，你自己看看用什么溶剂吧，我碰到过你一样的问题，一个月后解决了。祝你好运。

另外，会不会是水分影响啊，我以前做过一个也是异丙醇结晶，就是水分影响老结不出来！！

02 YANGYANG123

我做的东西也是有油状物，我先用良性溶剂把它溶掉，但是溶剂不要加太多，慢慢滴加。差不多的时候加不良溶剂也要慢慢加，加的时候要搅拌，如果还不析出固体那就加加热。不要着急慢慢来。

03 lihanghang

可以在冰箱里面冻一冻，之后再用钢铲扣一扣，估计能出固体。

04 journey0

加DMF不溶的应该不是你的产物，可能是一些无机盐类的东西，建议将你的油状物溶于DCM或者其他良性溶剂，水洗，干燥，过滤，浓缩后再考虑重结晶。不知道你的产物的结构，必要的时候可以考虑酸碱处理，将产物以盐的形式进行纯化。

05 20goodluck20

建议先测一下纯度，纯度不好就换换工艺，纯度好再析晶，异丙醇或是正己烷结晶时，有时常温或是0度左右很难析晶，这时可以再降低温度，一般在-20度~-40度，我曾经做过一个-40度的，晶型异常的好。注意，溶剂不要太多也不要太少，析晶时尽量不要晃动，否则晶型很受影响，好的晶型需要生长时间，就像珊瑚生长一样。

呜呜~~~~~~~估计楼主查看帖子心中顿时有一万只“草泥马”来回走过̷̷上帝给了黑色的眼睛，我却熬出了黑眼圈。

合成产品经常遇到这种情况，尝试了各种办法，最终无法结晶，因为样品含量太低、关键杂质没有去除或者结晶体系本身非常复杂，尤其一些样品人类生存环境下根本就不是晶体。

换个视角，打开一个锦囊，推开一扇窗

纯化的理想状态都是重结晶出来白花花的晶体，纯度100%，色谱图上一个高斯曲线，完美。

但是也存在一些结晶解决不了的问题：1.结晶收率低，反复结晶，损失严重。2.产品单杂要求高，通过结晶控制不住。3.结晶需要一定的产品纯度，需要先进行富集才能结晶得到合格产品。4.引入一些不希望引入的成分如丙酮、烷烃等。

遇到这些情况到底应该怎么办？通过案例分享和大家一起寻求更好的解决办法，也希望在留言区得到你的指点。

锦囊一，无法结晶的样品该如何处理

01 样品情况

鱼油为从深海鱼体内提取的不饱和脂肪酸（主要为EPA和DHA），黄色油状液体，稳定性较好，但易氧化，需低温避光避氧保存，易溶于乙醇、甲醇等有机溶剂，不溶于水，其中不饱和脂肪酸EPA已确定具有医用功效，结不了晶。

02 解决思路

通常经过预处理的鱼油中，EPA含量在30-40%之间，DHA和EPA结构相似，一般的层析方式并不能使二者得到很好的分离。拟通过具有高分离效率的连续色谱工艺将低含量的鱼油中EPA和DHA分离，并获得98.5%以上纯度的EPA。

03 原料谱图分析

检测方法

仪器：waters2695-2996

色谱柱：Hedera ODS-2 5um  4.6*250mm

流动相：乙腈90%-水10%

^{鱼油样品液相谱图检测图 EPA和DHA纯度分别为43%和32%}

04 填料筛选与纯化方法 

我们尝试使用了聚合物、凝胶型树脂、C18、C4、C30等多种填料，其中C18填料对鱼油中EPA和DHA分离效果较好。

连续色谱分离高纯度EPA鱼油

仪   器：NU3000-NP7001

色 谱 柱：C18（10μm）  10*250mm

流 动 相：甲醇88%-水12%

洗脱流速：3ml/min

上样量：1%

^{单柱分离度模拟曲线图} 

根据单柱实验设定连续色谱操作条件待极其稳定运行后，取样检测。

05 纯化结果

^{纯化样品检测谱图  样品纯度92.5%}

通过连续色谱工艺，我们将纯度40%的样品含量提高到98.5%以上，去除了样品中绝大部分杂质，收率80%以上，最终得到高含量的EPA鱼油。

锦囊二，富集后继续结晶

01 样品情况

“目标产物是合成的一个药物中间体，碱性，稳定性不好，60℃以下稳定，固体稳定，在碱液中相对稳定，在一般溶剂中时间长则发生变化。易溶于二氯甲烷和DMF，难溶于甲醇和乙醇，有紫外吸收。样品纯度要能达到80%以上才能结晶，而合成后的初始纯度只有30%左右。

02 解决思路

打算先使用柱层析的方法将样品纯度富集到80%以上，然后再做结晶。下图是粗品的分析图谱。

03 上样方式选择

样品溶解度低，所以考虑采用拌样的方法将样品吸附到填料上，但随即发现目标产物已降解。无论硅胶还是氧化铝都是同样结果，遂放弃，改用湿法上样方式。

04 填料筛选

考虑到需要分离碱性化合物，首选碱性氧化铝作为吸附剂。然而样品在氧化铝柱中停留时间过长发生降解，遂放弃。

通过多次筛选，两款的填料表现比较好， 10um的C18球型硅胶和无定型硅胶。

^{10μm球型硅胶制备谱图} 

色谱条件：

上样量：240mg

仪器：NS4201液相色谱系统

色谱柱： Si(10×250 mm，10μm)

检测波长：220nm

流动相：正己烷/乙酸乙酯

柱温：室温

流速：3ml/min

^{10μm球型硅胶分析谱图 样品纯度92.5%}

^{无定型硅胶制备谱图}

色谱条件：

色谱柱：无定型硅胶（10×250mm，30-50um）

仪器：NS4201液相色谱系统

上样量：200mg

流动相：正己烷/乙酸乙酯

检测波长：220nm

柱温：室温

流速：3ml/min

^{无定型硅胶纯化分析谱图 样品纯度88.7%}

05 结论

虽然两种填料都能制备出满足要求的产品，但综合考虑样品纯度、回收率、综合填料、溶剂成本等因素，我们最终选择了无定型硅胶纯化策略作为最终方案。

通过以上操作后，因为主要杂质去除效果好，样品继续重结晶，得到了较好的晶型，最终满足了客户要求。

后记

小编行走江湖多年，深谙世道艰辛，但还好办法总比困难多。本文引用两个实验室总结的小经验、小窍门和大家分享，抛砖引玉，希望读者可以拿出自己的诀窍，到平台留言区积极互动。

在此感谢汉邦科技实验室赵博士团队的干货支持，得以促成此文。