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K5500微量分光光度计测定DS-DNA的浓度及纯度

2008/09/04 14:58

阅读:3712

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应用领域:
发布时间:
2008/09/04
检测样品:
检测项目:
浏览次数:
3712
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38
参考标准:

方案摘要:

K5500微量分光光度计测定DS-DNA的浓度及纯度 用K5500微量分光光度计测量DS-DNA的浓度,评价DS-DNA的纯度。 实验原理:K5500微量分光光度计对DS-DNA进行紫外吸收扫描,给出扫描图;测量DS-DNA在260nm,280nm,230nm处的吸光值,由软件计算DS-DNA的浓度值,260nm与280nm处的吸光度的比值(A260/A280)及260nm与230nm处的吸光度的比值(A260/A230)来评价DS-DNA的纯度。多次测量,求测量的重复性。 样品:双链DNA(DS-DNA)样品 仪器:K5500微量分光光度计、移液枪 操作步骤: 空白对照 1 先用溶解核酸的溶剂作空白对照,以移液枪吸取溶剂(1~2µL)滴加到检测平台上。 2 放下取样臂。 3 点击软件界面上的“Blank”按钮,程序会自动记录空白值。 4用干净的吸水纸擦去上下检测平台上的溶剂。 样品测量 1 以移液枪吸取样品(1~2µL)滴加到检测平台上。 2 放下取样臂。 3 点击软件界面上的“Measure”按钮,即可得出样品参数(吸光度和浓度)和图表。 4 用干净的吸水纸擦去上下检测平台上的样品。 5 如需保存图表,可点击“Save Graph”按钮。 6 待全部样品测定结束后,点击“Show Report”按钮,已测样品的测定数据将出现在Excel表格中。 双链DNA的紫外吸收光谱图 得到双链DNA的紫外吸收光谱图如下: 双链DNA紫外吸收光谱图 样品在260nm处吸光度为3.5213Abs,浓度值为176.07ng/μL 黑色区域的波线图为双链DNA的吸收光谱图,在260nm处有最高吸收值,吸收值为3.5213(黄色框)。浓度值为176.07(绿色框),单位为ng/ul。260/280的比值为1.7749,用于评价核酸的纯度。 重复性:重复测量该样品5次,测得的浓度值分别为:176.07,174.56,177.42,175.43,176.10。 Δc=max|ci-1 / 5 Σci | /(1 / 5 Σci ) = (177.42-175.92) / 175.92 = 0.85%

产品配置单:

分析仪器

超微量分光光度计

型号: K5600

产地: 北京

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