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液相色谱串联质谱法测定血清中20种类固醇激素
2024/05/28 16:56
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方案摘要：
产品配置单：
Kinetex® 2.6 µm C18 100 ÅC18(ODS)柱00D-4462-Y0
型号：
产地：
品牌： 飞诺美
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方案详情：
样品前处理
本实验采用沉淀蛋白结合SPE固相萃取法对血清中20种激素 进行处理，具体步骤如下。 提取：准确量取200 μL样品于1.5 mL塑料离心管中，加入20 μL 同位素内标混合工作溶，200 μL甲醇，涡旋1 min，加入200 μL水， 涡旋1 min，10000 rpm离心5 min，取上层溶液待用。 净化：取SPE柱（Cleanert PEP 96 Well Microplates：2 mg）， 依次用200 μL甲醇活化，200 μL水平衡。取提取后上清液350 μL， 加载至SPE柱，弃去滤液；依次用200 μL 10 %乙腈水溶液和200 μL 正己烷进行淋洗，弃去淋洗液；加入30 μL洗脱溶剂进行洗脱，收 集洗脱液，用10 %乙腈水溶液稀释至200 μL，混匀待测。色谱条件
色谱柱：Kinetex® C18（2.6 μm，3.0×100 mm）； 流动相：A为0.5 mM氟化铵水溶液 B为甲醇，洗脱流程如表1； 流速：0.6 mL/min； 柱温：40 ℃； 进样体积：20 μL。
质谱条件
电离方式：电喷雾离子源，正负离子同时采集； 检测方式：分时间窗口 (schedule)，多反应监测 (MRM)； 离子源温度 (TEM): 600℃; 雾化气 (Gas1): 60 psi;辅助气 (Gas2): 60 psi； 气帘气 (Gurtain Gas): 35 psi; 电喷雾电压：5500V (+) / -4500V (-)；
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2024/05/28
