【飞诺美色谱】血浆中阿巴帕肽与基质干扰物的分离

概述

阿巴帕肽分子量3960.6，由34个氨基酸残基组成的

多肽，是甲状旁腺激素相关肽类似物。通过与甲状旁腺

激素受体结合调节体内的钙磷代谢，促进骨骼发育和骨

代谢，用于治疗研究骨质疏松症。人体内存在与阿巴帕

肽同源类似物，因此相同质谱离子下存在很多干扰。客

户端测试空白血浆中干扰很高，需要通过筛选色谱柱进

行干扰物分离。

关键词

阿巴帕肽；Kinetex XB-C18；LC-MS/MS

实验部分

3.1 仪器、试剂与材料

3.1.1 主要仪器设备

液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple

QuadTM5500)，配有电喷雾离子源(ESI)；

3.1.2 试剂材料

屈臣氏蒸馏水，甲醇、甲酸、乙腈均为色谱

级。

3.1.3 样品基质

标准品和基质样品由客户提供。

3.2 样品前处理方法

100uL血浆，加10uL标准品混匀后，加入100uL甲

醇，充分涡旋进行蛋白沉淀，15000rpm离心5min，

取上清100uL加入100uL纯水稀释后，混匀待测试。

实验过程同时做了相同处理的基质空白和基质后加

标。

3.3 质谱条件

离子源类型：电喷雾离子源（ESI）

扫描方式：多反应监测正负离子模式（MRM）

喷雾针电压：4500 V

离子源温度：550 ℃

加热器（GS1）：45 psi

辅助加热气（GS2）：55 psi

气帘气（CUR）：35 psi

碰撞气（CAD）：9

为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离

子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目

标化合物定量离子对以及内标监测离子对等参

数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考不

具备法律效力。

3.4 色谱条件

色谱柱： Kinetex XB-C18（2.1×100 mm,

1.7μm）；P/N: 00D-4498-AN

流动相A相：0.1%甲酸水溶液；

流动相B相：0.1%甲酸乙腈溶液；

流 速：0.3 mL/min；

柱 温：50 ℃；

梯度程序见表2：

3.5 结果与讨论

实验过程中通过筛选色谱柱，以及梯度的调整，

对基质中干扰物进行分离。最终筛选的到Kinetex

XB-C18（1.7um*2.1mm*100mm）能够对阿巴帕肽

进行很好的分离，见下色谱图。目标物周围分离出

很多相同离子的干扰峰。对犬血浆简单的蛋白沉淀

前处理后，回收能达到90%以上。但是蛋白沉淀后相

当于稀释了4倍，如果需要提高灵敏度，仍需要采用

SPE的方式去进一步净化和富集。

结论

一、Kinetex XB-C18（1.7um*2.1mm*100mm）能

够实现阿巴帕肽与基质干扰物的基线分离，上机溶剂为

低于50%甲醇；

二、蛋白沉淀后回收可以达到90%以上，但是同时

这种前处理也对化合物进行了稀释，如需提高灵敏度，

建议采用SPE的方式进行进一步净化和富集；

三、多肽类化合物容易出现吸附性，标准品配制溶

剂建议添加0.1%BSA和1%乙酸来降低吸附，同时全程使

用低吸付耗材。