在动物体内具有生物活性的是维生素K2,而维生素K1和 维生素K3都要转化为维生素K2才能起作用。三种维生素 K的形式都在肝中转化成维生素K2, 并和胃肠微生物合 成的维生素K2一起被吸收利用。维生素K2是一系列含有 2-甲基-1, 4-萘醌母核及C3位带有数目不等的异戊二烯 结构单元的萜烯侧链化合物的统称,根据萜烯侧链上碳 元素的数目,可分为K2(10) 、 K2(20) 、 K2(35) 、 K2(40)等。 维生素K2(35)则为萜烯侧链上有35个碳元素的维生素K2; 维生素K2(35)亦称为甲萘醌-7,这是根据其萜烯侧链上 有7个异戊二烯侧链命名的。维生素k2包括几种不同的 形式, 人类饮食中最常见的维生素k2形式为甲萘醌 - 4(mk4)和甲萘醌-7(mk7)。
MK-4; MK-7; Peptide-4-W; Kinetex F5; LC-MS/MS
液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple
QuadTM5500),配有电喷雾离子源(APCI);
孔正压装置(Agela Cleanert M96); 氮吹浓缩仪(Agela Cleanert V96)。
屈臣氏蒸馏水, 甲醇、甲酸 、 乙醇均为色谱 级。
预处理: 200 µL血浆加入800 µL甲醇涡旋, 10000g/5min 离心取上清,待净化;
活化: 96孔板依次使用 1mL甲醇、1mL水活 化;
上样: 加载预处理后的血浆至活化后孔板; 淋洗: 使用1mL水淋洗孔板;
洗脱:用500 µL乙醇洗脱2次,涡旋混合,待检 测。
色谱柱: Kinetex F5(3.0×50 mm, 2.6 μm, 100 Å); P/N: 00B-4723-Y0
流动相B相: 0.1%甲酸甲醇溶液; 流 速: 0.6 mL/min;
柱 温: 40 ℃; 进样量: 15 μL; 梯度程序见表2:
扫描方式: 多反应监测正负离子模式(MRM) 喷雾针电压: 5500 V
辅助加热气(GS2): 60 psi 气帘气(CUR): 40 psi
为获得较好的稳定性和灵敏度,各化合物监测 离子对的去簇电压(DP)和碰撞电压(CE), 目标化合物定量离子对以及内标监测离子对等 参数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考 不具备法律效力。
由表4可知,MK-4 、MK-7在外标法模式下相对 标准偏差RSD小于10%可以满足分析需求。
本实验建立了血浆中MK-4、 MK-7的检测方法。