【飞诺美色谱】布洛芬片的美国药典（USP）溶出度检测：一种可以替代传统UV的快速HPLC检测方法

概述：

布洛芬是一种非类固醇类消炎药 （NSAID），可用来缓解骨关节炎或

类风湿性关节炎的症状，也可用于缓解头痛，牙痛，关节疼痛和背痛等

疼痛。布洛芬有多种制剂可供选择，如片剂，胶囊，咀嚼片以及口服溶

液。在本技术笔记中，我们展示了一种对于布洛芬片溶出度检测的替

代方法。与美国药典 （USP） 中关于布洛芬片溶出度检测推荐的UV检

测方法不同，这种快速的 HPLC 替代方法可以在较短的时间内得到更

好的峰形。通过对两支不同规格但符合USP允许调整范围要求 （USP

通则 <621>）的L1 色谱柱进行对比。进行溶出度检测，整体分析时间

小于 2 分钟，并且峰形可以和标液进样媲美。色谱柱的上样量也通过

不同的进样体积进行了研究。

材料

溶出度测定法

布洛芬标样及所用试剂购于 Sigma-Aldrich。

布洛芬片采购于当地药店。

实验条件：

溶出度测定法

溶出剂的制备基于美国药典 （USP） 中关于布洛芬片溶出度检测的相

关方法。 600 mg 布洛芬片溶解于 pH 7.2 的磷酸盐缓冲介质中。关于

溶出介质的制备，将 6.89 g 的磷酸二氢钠单水合物（NaH2PO4 分子

量 137.99）加入 800 mL 纯水中，然后用 50% NaOH 调节 pH 到

7.2 。最后定容到 1000 mL。

仪器装置：篮法， 50 RPM, 900mL

时间点： 60 min 单个时间点

样品通过 0.45 µm RC滤膜的针式过滤器进行过滤（针式过滤器货

号：AF0-2103-52, 塑料一次性注射器货号：AS0-8409）

标准溶液：50 µg/mL 溶解于溶出介质

流动相制备

流动相按照布洛芬片 USP 相关方法进行制备，将 4.0 g 氯乙酸溶于 400 mL 纯水中，并通过氢氧化铵将其调节到 pH 3.0 ，之后再与 600

mL乙腈混匀。

表1：

两支不同规格色谱柱上布洛芬片溶出度检测的 USP 拖尾因子、峰高以及柱效

图 1：

标样与溶出样品的色谱图对比

图 2：

色谱柱上样量测试

图 3：

标样与溶出样品的色谱图对比

图 4：

色谱柱上样量测试

结果与讨论

图 1 显示的是布洛芬标准溶液和溶出样品的对比图。该图使用的色谱

柱为 Kinetex C18 5 µm 150 X 4.6 mm，流速为 2.0 mL/min，进样量

5 µL。可以看出，溶出样品的保留时间和峰形都与布洛芬标准溶液类似。

为了测试色谱柱的上样量，我们在该色谱柱上尝试了不同的进样量 （

如图 2 所示）。随着进样量的增大，分析物的峰高逐渐增大，杂质的峰

高也随之增大。但是，杂质峰与主峰之间的分离度很好。因此，增大进

样量并不会对布洛芬溶出样品的定量分析造成困扰。

表 1 展示了两支不同规格 Kinetex 色谱柱的USP拖尾因子、峰高以及

柱效。可以看出，随着上样量的增大， USP 拖尾因子也随之增大。当进

样量为 5 µL 时，拖尾因子 1.122; 当进样量上升到 50 µ L时，拖尾因子

增加到了 1.395。 USP 系统适应性测试要求对于布洛芬片，拖尾因子

不应超过 2.5（NMT 2.5）。不同进样量溶出样品的拖尾因子完全符合

方法要求。并且，色谱峰的响应强度也使得准确定量溶出样品中的布

洛芬含量成为可能。当需要检测低含量、缓释片剂，或者比较短的溶出

时间点时，就需要较大的进样量来保证足够的峰强度以进行定量。本

实验中验证的不同进样量显示，即使达到 50 µL 的进样量，色谱峰的

峰形和强度依旧保持良好。

USP通则 <621> 允许等度方法对色谱柱规格以及粒径大小进行调

整。只需要保证色谱柱长度 （L） 和粒径 （dp） 的比值 （L/dp） 在

-25% 到 +50% 之间，我们就可以通过使用较小的粒径以及不同长度的色谱

柱来获得更佳的分离效果。第一支色谱柱 （Kinetex 5 µm C18 150 x

4.6mm） 的 L/dp 为 30,000 v Kinetex 2.6 µm C18 75 x 4.6mm） 的 L/

dp 为 28,864。可以看出，该调整在 USP 通则 <621> 允许的范围内。

图 3 和图 4 为使用第二支色谱柱 （Kinetex 2.6 µm C18 75 x 4.6mm）

所获得的色谱图。所使用的样品与第一支色谱柱 Kinetex 5 µm C18

150 x 4.6mm 相同（见图 1 与图 2 ）。由于使用了较小的粒径，色谱柱

的背压会明显升高，因此我们将流速降低到 1.8 mL/min 来减小背压

以使其仍在 HPLC 系统的背压范围内。根据 USP 通则 <621> 的规

定，等度方法的流速可以在 ± 50% （ 范围内进行调整。虽然该色谱柱

75 x 4.6 mm） 只有前一支 （150 x 4.6 mm） 一半长度，但其柱效（塔

板数/米）却因为使用了较小的粒径 （2.6 µm） 而增大。因此，在使用该

色谱柱时，可以观察到峰强度明显增加，并且峰宽变窄。使用较小粒径

的色谱柱可以缩短分析时间，但是，即使减小流速，2.6 µm 粒径色谱

柱的背压 （约 220 bar） 也会比 5 µm 粒径色谱柱的背压 （约 170 bar）

明显增大。如果 HPLC 系统对于压力的限制不大，那么使用 Kinetex

2.6 µm 色谱柱对于缩短分析时间大有裨益。可以看到，使用 2.6 µm

较短色谱柱可以将布洛芬的保留时间缩短 50%。

结论

在此关于布洛芬片的 USP 溶出度检测中，布洛芬的溶出含量可以通

过 HPLC-UV 色谱法进行检出。溶出样品和标准溶液都与传统 UV 吸

收检测法进行了对比。可以看出，通过采用 HPLC 色谱检测法，色谱峰

的强度足以对溶出样品中的布洛芬进行准确定量，并且整个分析时间

少于 2 分钟。本实验使用了两支符合USP通则 <621> 调整要求的不

同规格Kinetex 色谱柱进行分析。该溶出度检测方法针对中国生物等

效性 （BE） 市场进行调整的。该方法显示出一种与传统 UV 检测不同

的新的 HPLC 色谱分析法。