摘要:本实验重现了《BJS201913 食品中辛基酚等 5 种酚类物质的测定方法》,使用 Cleanert
PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉样品进行了测试。样品经乙腈提取后,Cleanert PEP
固相萃取柱净化,乙腈洗脱,Kinetex EVO C18 液相色谱柱进行检测,自动进样器前连接
Venusil XBP C18 色谱柱作为捕集柱,采用内标法定量。结果表明,当添加水平为 5 µg/kg
和 20 µg/kg 时,5 种酚类物质相对回收率在 80% ~ 120%之间,能够满足检测要求。
关键词:辛基酚;壬基酚;正壬基酚;正辛基酚;双酚 A;Cleanert PEP;Kinetex EVO C18;
Venusil XBP C18;
样品信息
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
液相色谱串联质谱仪(SCIEX API 4000+ );
试剂材料
固相萃取小柱:Cleanert PEP,200 mg/6 mL,使用前用 18 mL 甲醇活化,6 mL
水平衡;
实验用乙腈、水、甲醇均为质谱级试剂;
标准储备溶液(100 mg/L):分别称取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基
酚和双酚 A 标准物质 10 mg,用甲醇溶解,并转移至 100 mL 容量瓶中,定容至
刻度,标准储备液浓度为 100 mg/L。于-20 ℃冰箱中保存。
混合标准中间溶液(1 mg/L):分别准确吸取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、
正辛基酚和双酚 A 标准储备液 1 mL 至 100 mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,
摇匀,制成 1 mg/L 的混合标准中间溶液,置于 4 ℃冰箱中保存。
同位素内标标准储备溶液(100 mg/L):分别称取壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、
对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚 A -D4同位素内标 10 mg,用甲醇溶解,并
转移至 100 mL 容量瓶中,定容至刻度,标准储备液浓度为 100 mg/L。于-20 ℃
冰箱中保存。
同位素内标混合标准中间溶液(1 mg/L):分别准确吸取壬基酚-13C6、正壬
基酚-D4、对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚 A -D4 同位素内标标准储备液各 1
mL 至 100 mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,制成 1 mg/L 的混合标准中
间溶液,于 4 ℃冰箱中保存。
同位素内标混合标准工作液(100 µg/L):分别准确吸取同位素内标标准中
间溶液 1 mL 至 10 mL 容量瓶中, 用甲醇定容至刻度,摇匀,制成 100 µg /L 的
混合标准工作液。临用时配制。
混合标准工作溶液:分别准确吸取混合标准中间液,加入同位素内标混合标
准中间溶液,使壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚 A 浓度分别为 0.5
µg/L、1 µg/L、2 µg/L 、5 µg/L、10 µg/L、20 µg/L 和 50 µg/L 的混合标准系列工
作溶液。临用时配制。
样品基质
实验采用的基质为猪后臀肉,均质后放冰箱冷冻备用。
样品制备
样品提取
称取 1 g 已均质好的样品,置于 50 mL 离心管中,加入同位素内标混合标
准工作溶液 0.1 mL 和 5 mL 乙腈,涡旋混匀 1 min,超声提取 15 min,8000 r/min
离心 5 min,取上层清液;残渣再使用 5 mL 乙腈重复提取一次,合并乙腈相,
置冰箱-20℃冷冻 2 小时,取出于 8000 r/min 离心 5 min,取上清液待净化。
样品净化
将上述待净化液加 30 mL 水稀释,混匀,全部经过预先活化、平衡的 Cleanert
PEP 柱,控制流速为 1 ~ 2 mL/min,弃去滤液,然后使用 12 mL 的 60 %甲醇水
溶液(V/V)淋洗,弃去淋洗液,再用 6 mL 乙腈洗脱,接收洗脱液,于 50℃下
氮吹,控制氮气流量,缓慢氮吹至近干,残渣用 1 mL 甲醇复溶,8000 r/min 离
心 5 min,取上层清液待测。
实验条件
色谱条件
色谱柱:Kinetex EVO C18;(2.6 µm,3.0 × 50mm);
捕集柱:Venusil XBP C18;(5 µm,4.6 × 50 mm);
流动相 A:0.05%氨水溶液;
流动相 B:甲醇;
流 速:400 µL/min;
柱 温:30℃;
进样量:10 µL;
梯度程序:
质谱条件
电喷雾电离负离子模式 (ESI-);采集方式:多反应监测 (MRM),离子源温
度:650℃;雾化气压力:55 psi,辅助气压力:65 psi;气帘气压力:20 psi;电
喷雾电压:-4500V。
由表 4 可知,采用 Cleanert PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉基质中
的 5 种酚类物质进行测试,加标回收率在 80% ~ 120%之间,RSD 均小于 10%,
方法中 5 种酚类物质的检出限为 0.1 µg/kg ~ 1.0 µg/kg(S/N=3),能够满足检测
要求。
实验谱图
结论
本实验使用 Cleanert PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉样品中的辛基
酚等 5 种酚类物质进行检测。实验表明,加标量为 5 µg/kg、20 µg/kg 时,5 种酚
类物质的回收率在 80% ~ 120%之间,RSD 值均小于 10%,平行性良好,能够满
足实验要求。说明 Cleanert PEP 可用于猪肉中辛基酚等 5 种酚类物质的检测。
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