【飞诺美色谱】化妆品中 11 种糖皮质激素的同时测定 SPE-LC-MS/MS 法

1. 实验材料 1.1 糖皮质激素类药物标准品

‍1.2 标准储备液及混合标准工作液的配置 分别精密称取适量的 11 种糖皮质激素标准品，用甲醇溶 解定容，分别配制成 1000 µg/mL 的贮备液。-20℃ 以下保存。 混合标准工作液：准确量取糖皮质激素类药物标准贮 备液适量，用20%乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准 工作液，现配现用。 1.3 标准储备液及混合标准工作液的配置 a) 10% 亚铁氰化钾溶液：称量 2.3 g   K4Fe(CN)6•3H2O，用水溶解定容至 20 mL； b) 20% 乙酸锌溶液：称量 4.78 g C4H6O4Zn•2H2O， 用水溶解定容至 20 mL； c) 定容液：量取 70 mL水 和 30 mL 乙腈，混匀后加入 100 µL 甲酸混匀。 2. 样品提取 霜膏类化妆品：称取 0.2 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50  mL 离心管，混匀。加入 3 mL 饱和氯化钠溶液，涡旋混合 使样品分散，加入 3 mL 乙腈，超声提取 5 min，8000 r/min 离心 5 min，吸取上层清液于另一 50 mL 离心管中，下层 氯化钠溶液用 2 mL 乙腈重复提取一次，合并二次乙腈提 取液，往提取液加入 40 mL 去离子水，混匀，加入亚铁氰 化钾溶液 0.2 mL，混匀，加入乙酸锌溶液 0.2 mL，混匀， 8000 r/min 离心 10 min，作为待净化液。

精油类样品：称取 0.5 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50 mL离 心管，混匀。加入 4 mL 正己烷，涡旋混合使样品分散，加 入4 mL 50%乙腈水溶液，涡旋提取2 min，8000 r/min离心5  min，吸取下层提取液，上层正己烷用4 mL 50%乙腈水溶液 重复上述提取步骤一次，合并二次50%乙腈提取液，往提取 液加入36 mL去离子水，混合，加入亚铁氰化钾溶液0.1 mL， 混匀，加入乙酸锌溶液 0.1 mL，混匀，8000 r/min 离心 10  min，作为待净化液。 3. 固相萃取柱净化 将 Cleanert® PEP-2 固相萃取小柱置于 Qdaura® 卓睿全自 动固相萃取仪，上样液转移至上样管中，溶剂置于相应的溶 剂瓶中，设定操作程序如下：用 5 mL 甲醇、10 mL 水活化。 将上样管中溶液全部上样，然后以 10 mL 10% 乙腈水溶液淋 洗小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)。最后以 6 mL 甲 醇洗脱小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)，以上操作流 速均设定为 1 mL/min。取出收集瓶，于 40℃氮气吹干，用 1  mL 定容液溶解定容，过 0.22 µm Nylon 滤器，待测。 4. 检测条件 4.1 液相色谱条件 色谱柱：Venusil® ASB C18，3 µm，150 Å，2.1 × 150 mm； 柱温：30℃； 进样量：10 µL。 流动相：A 相：含 0.1% 甲酸的水溶液； B 相：含 0.1% 甲酸的乙腈溶液； 梯度洗脱程序见表4

4.2 液相色谱条件 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：负离子扫描； 检测方式：多反应监测； IS：-4500V； GS1：55Psi； GS2：55Psi； TEM：550℃；

5. 结果与讨论 以市售玫瑰精油和护手霜为基质，进行添加回收实 验，进行0.1 µg/g 和 0.05 µg/g 添加浓度的实验，11 种糖皮 质激素的回收率和重现性如下：

实验结论：使用 Cleanert® PEP-2、Venusil® ASB C18， API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析，建立了 一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法，在 高低添加水平下，11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%- 120%；相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快 速、准确，可用于化妆品中糖皮质激素的检测。