摘要:本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器,按照 GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳制品中核苷酸的测定方法,使用 Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱(5 µm,150Å;4.6 × 250 mm)对 5 种核苷酸混合标准溶液、某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液进行分析测定。结果表明:在波长为 254 nm,流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH3.2)︰甲醇=1000︰4(v/v)时, Venusil ® AQ C18 Plus色谱柱可将 5 种核苷酸完全分离,基质样品分离效果与国标标准谱图接近,可用于婴幼儿奶粉中 5 种核苷酸的分析测定。
关键词:高效液相色谱法;紫外检测器;婴幼儿奶粉;核苷酸;Venusil ® AQ C18 Plus
前言
核苷酸是生命遗传物质 DNA 和 RNA 的基本组成单位,是体内合成核酸的前身物。婴幼儿正处在快速生长发育阶段,身体对核苷酸的需求量超过体内合成核苷酸的能力,但母乳可为婴幼儿提供所需核苷酸。而对于没有母乳喂养的婴幼儿,食用含足量核苷酸的配方奶粉,不仅可提高免疫力,也可保护婴幼儿肠胃健康。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪,紫外检测器;
试剂材料
屈臣氏水;甲醇为色谱纯;
磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、冰乙酸、四丁基硫酸氢铵为分析纯;
胞嘧啶核苷酸对照品、腺嘌呤核苷酸对照品、尿嘧啶核苷酸对照品、次黄嘌呤核苷酸对照品、鸟嘌呤核苷酸对照品:由某乳制品公司提供;
高效液相色谱柱:Venusil ® AQ C18 Plus; 5 μm,150 Å,4.6 × 250 mm;
样品制备
5 种核苷酸混合标准溶液:分别称取核苷酸标准品 CMP、AMP、UMP 各 10 mg、GMP、IMP 各 5 mg(精确至 0.1 mg),用水溶解成并定容至 100 mL,混匀,即得;某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液:称取 5.0 g 奶粉样品,用 20 mL 热水(50-60℃)充分溶解试样,冷却至室温;用 10%乙酸溶液调节 pH 至 4.1,移至 50 mL 容量瓶中,定容,滤纸过滤,所得滤液用 0.45 μm 滤膜过滤,即得供试品溶液。
色谱条件
色谱柱:Venusil ® AQ C18 Plus; 5 μm,150 Å,4.6 × 250 mm;
流动相:磷酸盐缓冲溶液(称取 1.360g 磷酸二氢钾,加 0.4753 g 四丁基硫酸氢铵,加 900 mL 水溶解,用 0.1 mol/L 磷酸氢二钾溶液调 pH 至 3.2,定容至 1000 mL)︰甲醇=1000︰40(v/v);
波 长:254 nm;
柱 温:25℃;
流 速:1.0 mL/min;
进样量:10 µL。
结果与讨论
本实验按照 GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法,使用Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱对 5 种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测,由以下结果可知,5 种核苷酸分离度均大于 1.5,实现完全分离;对婴幼儿奶粉样品的分离效果与国标标准图谱接近。
结论
本本实验按照 GB5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法,使用Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱对 5 种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测,结果表明在上述实验条件下,Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱可用于婴幼儿奶粉中5 种核苷酸的分析检测。
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