【飞诺美色谱】鱼肉中氯霉素氟苯尼考甲砜霉素的分析方法

摘要 ：本实验重现了 GB/T 22338-2008 的前处理方法，采用 Cleanert ® Silica 小柱结合液相色谱串连质谱（LC-MS/MS）对鱼肉中的氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素进行了测定。样品经乙腈提取，Cleanert ®Silica 小柱净化，Venusil MP C18 色谱柱（3 µm，100 Å；3.0 × 50 mm）分离，采用 0.1%甲酸水和0.1%甲酸乙腈为流动相进行洗脱，LC-MS/MS 进行检测，内标法定量。结果表明，当加标量为 4.0µg/kg 时，回收率在 70% ~ 115%之间，能够满足检测要求。

关键词 ：氯霉素；氟苯尼考；甲砜霉素；Cleanert ® Silica；LC-MS/MS；鱼肉

前言

氯霉素类属酰胺醇类广谱抗生素。包括氯霉素及其衍生物，主要有氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考。氯霉素有很强的毒副作用，能够导致再生障碍性贫血症，不可逆，且与使用剂量和频率无关，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止在动物源性食品中检出。中国在2002年也把它列为违禁药物，禁止在动物食品中检出。甲砜霉素对血液系统的毒性比氯霉素小，但可以抑制人体免疫系统、红细胞和血小板的生成，除中国和日本外，欧共体和美国均禁用于食品动物。氟苯尼考虽不会引起再生障碍性贫血症，但对动物胚胎有影响。

本文通过对国标的重现，建立了鱼肉中氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素同时测定的分析方法。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

AB SCEIX API 4000 + 液相色谱串联质谱仪。

试剂材料

乙腈、正己烷、丙酮为色谱纯；实验用水为超纯水；正丙醇为分析纯；

混合标准工作溶液：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考，甲醇溶解；

Cleanert ® Silica 固相萃取小柱：200 mg/3 mL。

样品制备

样品提取

称取均质好的鱼肉样品 5 g 置于 50 mL 离心管中，加入 30 mL 乙腈，涡旋 1 min，超声提取 5 min，8000 r/min 离心 5 min，取全部上清液置于分液漏斗中，并向分液漏斗中加入 15 mL 乙腈饱和的正己烷溶液，震荡 5 min，静置分层，转移乙腈层至鸡心瓶中，残渣再加入 30 mL 乙腈按照上述步骤液液萃取一次，合并两次提取液，向鸡心瓶中加入 5 mL 正丙醇，摇匀，40℃旋蒸至近干，再用氮气吹干，加入 5 mL 丙酮-正己烷（1+9）溶解，摇匀，待净化。

样品净化

将 Cleanert ® Silica 小柱用 5 mL 丙酮/正己烷（V/V，1+9）活化平衡，将上述待净化液全部上样于小柱上，弃去流出液，再用 5 mL 丙酮-正己烷（V/V，6+4）洗脱小柱，收集流出液，于 40℃下旋蒸至近干，用水定容至 1 mL，待检测。

以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。

实验条件

色谱条件

色谱柱：Venusil MP C18， 3 µm，100 Å，3.0 × 50 mm

流动相：A相-0.1%甲酸水溶液，B相-0.1%甲酸乙腈

柱 温：30℃

进样量：5 µL

梯度洗脱条件(见表1)

质谱条件

离子源：ESI-；电喷雾电压：-4500 V；雾化气压力： 50 psi；气帘气压力：10 psi；

辅助气压力：60 psi；离子源温度：550℃；采集方式：多反应监测(MRM)。

结果与讨论

由表 3 可知，采用固相萃取结合液相色谱串联质谱的方法检测鱼肉中氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素，加标回收率在 70% ~ 115%之间，能够满足检测要求。由图 1 可知，用 Venusil MP C18 色谱柱检测氯霉素类药物，峰形良好，且保留时间稳定。

实验谱图

结论

本实验建立了鱼肉中 3 种氯霉素类药物的前处理方法，并结合 LC-MS/MS 对样品进行了检测。 结果表明，对于加标量为 4.0 µg/kg 的鱼肉样品，加标回收率在 70% ~115%之间，满足检测要求。说明该方法适用于鱼肉中氯霉素类药物的同时检测。

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