1. 样品预处理
鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉;虾去头、去壳、去附肢,取可食肌肉部分;蟹、中华鳖等取可食肌肉部分;样品切为不大于 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm 的小块后混匀,放置冰箱中冷冻贮存备用。
2. 样品提取
将样品解冻,称取样品 5 g (精确到 0.001g),置于 50mL 玻璃离心管中,加入乙酸乙酯 20 mL,均质机均质 1min,分散均匀,提取氯霉素,4000 r/min 离心 3 min,将乙酸乙酯层转移到 100 mL 细口鸡心瓶中。再向离心管中加乙酸乙酯 10 mL,用原均质机均质混合 1 min,4000 r/min离心 3 min,合并乙酸乙酯提取液于 100 mL 细口鸡心瓶中,于 40℃ 水浴中减压旋转蒸发至干。
3. 脱脂
向鸡心瓶中加 1 mL 甲醇旋涡混合溶解残留物,再加入 15 mL 正己烷和 25 mL 4% 氯化钠溶液,盖塞振荡混合1 min,充分混合提取脂肪,转移到另一 50 mL 离心管中,4000 r/min 的速度离心 2 min,除去上层正己烷相并弃去。再向水相中加 10 mL 正己烷,重复提取一遍,弃去正己烷相。水相中加入 15 mL 乙酸乙酯,旋涡混合器混合 2 min,3000 r/min 离心 3 min,吸取乙酸乙酯层,经过无水硫酸钠柱脱水过滤于 50 mL 鸡心瓶中。再向水相中加入 5 mL 乙酸乙酯,重复上述操作。用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱,合并提取液于 50 mL 鸡心瓶中,在 40℃ 水浴中减压旋转蒸发至干。对于大部分样品,到此步骤净化效果已可达到要求,对于净化不完全的样品可经 C18 固相萃取柱进一步净化。
加入 2 mL 乙酸乙酯溶解提取物并转移于 5 mL 具塞离心管中,用 1 mL 乙酸乙酯洗涤鸡心瓶,合并乙酸乙酯,于50~55℃ 的砂浴中吹氮蒸发至近干,再用 1 mL 乙酸乙酯洗涤离心管壁并吹干。以 5 mL 5%(V/V) 的乙腈水溶液溶解。待净化。
4. Cleanert® C18 柱净化 (1g / 6mL)
柱活化:依次用 5 mL 甲醇、5 mL 氯仿、5 mL 甲醇和 5 mL水淋洗活化(注意:不要干)
上样:把处理好的样品溶液过柱(流速控制在 1 mL/min 以内)
淋洗:6 mL 水淋洗 C18 柱,让洗涤液完全流出 C18 柱后抽干
洗脱:5 mL 乙腈洗脱并收集洗脱液
浓缩:在温度 50~55℃ 的砂浴中,用氮气吹除乙腈至近干,再用 1 mL 乙腈洗涤离心管壁并用氮气吹干。
此过程可在 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪上完成。
5. 衍生化
向干的残留物中加 100 µL 衍生化试剂 (N,O-双 (三甲基硅烷基) 三氟乙酰胺 (BSTFA) / 三甲基氯硅烷 (TMCS) 体积比99:1),盖塞并旋涡混合 10s,在 70℃ 烘箱中反应 30 min。再在50~55℃ 砂浴中,用氮气流吹除多余的试剂,至样品管刚好吹干为止 (注意:此步过长的吹干时间可导致丢失分析物)。加入 0.5 mL 正已烷,旋涡混合10s,供气相色谱分析用。
6. 订货信息
更多
【飞诺美色谱】(GB/T 20762-2006)猪肉中林可霉素的测定
厂商
2024.08.16
【飞诺美色谱】(GB/T 21312-2007)猪肉中氟喹诺酮类药物的测定
厂商
2024.08.16
【飞诺美色谱】(GB/T 20759-2006)猪肉中磺胺类药物的测定
厂商
2024.08.16
【飞诺美色谱】(GB 23200.20-2016)猪肉中阿维菌素的测定
厂商
2024.08.16