【飞诺美色谱】烤肉中5种杂环胺类物质的分析方法

前言

70年代末，人们发现从烤肉或烤肉提取的化合物具有致突变性，对烤肉中主要致突变物的研究表明，这类物质主要是复杂的杂环胺类化合物(Heterocyclic amine)。长期实验表明，杂环胺在代谢活化系统中具有较强致突变性，并能引发啮齿动物以及灵长类动物肝脏、乳腺、结肠等多种靶器官产生肿瘤。与其他致癌物相比，杂环胺的毒性较强。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

AB SCEIX API 4000+液相色谱串联质谱仪。

试剂材料

甲醇、乙腈、乙醇、正己烷、二氯甲烷均为色谱纯；氢氧化钠为分析纯；实验用水为超纯水；

5种杂环胺类物质混合标准工作溶液：MeIQ、MeIQx、4，8-DiMeIQx、7，8-DiMeIQx、PhIP：乙腈溶解；

基质混合标准工作溶液

取高浓度5种杂环胺类混合标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成0.01 µg/mL的基质混合标准工作溶液。

Cleanert® PS固相萃取小柱：200 mg/3 mL。

样品制备

样品提取

称取烤肉试样2 g置于50 mL离心管中，加入10 mL 40 g/L氢氧化钠︰甲醇=70︰30（V/V）混合溶液，均质1 min。均质器刀头分别用5 mL上述溶液各洗涤两次，洗涤液合并至样品提取离心管中。提取液在10000 r/min条件下离心10 min，待净化。

样品净化

将Cleanert® PS小柱依次用2 mL甲醇、3 mL 4 g/L氢氧化钠溶液活化平衡。量取10 mL提取液加入固相萃取柱中，弃去流出液后，依次用3 mL 4 g/L氢氧化钠︰甲醇=45︰55（V/V）混合溶液、2 mL正己烷淋洗，每次淋洗完后都需将柱体内淋洗溶液抽干，最后用3 mL乙醇︰二氯甲烷=10︰90（V/V）混合溶液洗脱，洗脱流速小于1 mL/min。洗脱液于氮气浓缩至近干后，加入1 mL的10%乙腈水溶液复溶，涡旋混匀，过0.22 μm Nylon针式过滤器，待检测。

以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。

实验条件

色谱条件

色谱柱：Venusil MP C18，3 µm，100 Å，3.0 × 50 mm；

流动相A：0.1%甲酸水溶液；

流动相B：0.1%甲酸乙腈溶液；

柱 温：40℃；

进样量：5 µL。

梯度洗脱条件(见表1)

表1. 液相色谱梯度洗脱条件

质谱条件

离子源：ESI+；电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：50 psi；气帘气压力：25 psi；辅助气压力：50 psi；离子源温度：500℃；采集方式：多反应监测(MRM)。

表2. 5种杂环胺类物质质谱参数

注：“下划线”为定量离子。

结果与讨论

由表3可知，采用SPE结合LC-MS/MS的方法检测烤肉中5种杂环胺类物质，加标回收率在80% ~ 110%之间，且变异系数小于16%，能够满足检测要求。由图1 ~ 图4可知，用Venusil MP C18色谱柱检测5种杂环胺类，峰形良好，且保留时间稳定。

表3. 烤肉中5种杂环胺类物质加标回收实验结果(添加水平0.01 mg/kg)

图1. 0.01 µg/mL杂环胺类混合标准溶液LC-MS/MS色谱图

图2.烤肉样品空白LC-MS/MS色谱图

图3. 0.01 µg/mL烤肉基质混合标准溶液LC-MS/MS色谱图

图4. 0.01 mg/kg烤肉基质加标LC-MS/MS色谱图

结论

本实验重现了GB5009.243-2016烤肉中杂环胺类物质的前处理方法，并结合LC-MS/MS对样品进行了检测。结果表明，对于加标量为0.01 mg/kg的烤肉样品，加标回收率在80% ~ 110%之间，满足检测要求，且变异系数小于16%，稳定性良好。说明该方法适用于烤肉中5种杂环胺类物质的同时检测。

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