猪粪中饲用酵母菌的分离与鉴定及干燥

一、实验材料

猪场肥猪新鲜猪粪及酿酒糟

二、主要设备及仪器

PCR扩增仪美国、高速低温离心机、浓度测定仪、超纯水系统、超净工作台；

恒温摇床、恒温振荡器、台式离心机、电热恒温水浴锅、恒温烘箱、恒温培养箱；

恒温磁力搅拌器、电子天平、计算机成像系统、医用高压灭菌锅、格兰仕微波炉；

稳压稳流电泳仪、超低温冰箱、PH计。

三、缓冲液和常用试剂的配置

   1裂解液

   2醋酸钾

   3醋酸钠

   4TE缓冲液

   5TAE储备液

   6琼脂糖凝胶电泳上样缓冲液

   7EB贮存液

四、培养基

1LB培养基:胰蛋白胨

2牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏

3马丁氏培养基：葡萄糖

4马铃薯培养基：马铃薯

5麦芽汁培养基葡萄糖

6WL营养培养基

五、酵母菌的分离与纯化

 A分离：采用稀释平板分离法,称取待测样品10g左右,放入装有无菌水90ml并加入玻璃珠的离心管中,置于摇床震荡20min,使微生物细胞分散,静置。即成10-1稀释液;再用1支无菌吸管吸取10-1稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中,吹吸3次,让稀释液充分混合,即成10-2稀释液;再换1支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中,即成10-3稀释液。同理,制成10-4、10-5、10-6稀释液。取合适倍数的稀释液1ml加入到孟加拉红培养基中,静置30分钟后倒置放于28℃恒温培养箱中,培养三天。

B纯化培养:划线纯化法。灭菌PDA培养基,倒平板,挑取单菌落划线,28℃倒置培养三天,如此工作重复三次,以得到纯菌体。

六、酵母菌的鉴定

从猪粪和酒糟中共分离八株酵母菌,经鉴定共有种酵母菌,它们分别是皱褶假丝酵母、酿酒酵母、一东方伊萨酵母、团假丝酵母、热带假丝酵母、毛抱子菌属。从猪粪中分离两株酵母,分别是热带假丝酵母菌和毛抱子菌。这些分离出的酵母菌,除毛抱子菌外,其他都可以作为饲料酵母使用。

七、酵母菌发酵液的喷雾干燥。