RVLM型微生物快速检测系统 Q&A

1、微生物检测瓶除可以检测活菌外，死菌可以检测么？
答：不能检测死菌。

2、微生物检测瓶可以检测厌氧菌么？
答：检测瓶的检测范围即包括厌氧菌（亚硫酸盐梭状芽胞杆菌SulphitereducingClostridia，产气荚膜杆菌Clostridiumperfrigens），也包括需氧菌。检测不同种微类生物的检测瓶中试剂不同。对于厌氧菌，我们有特殊的试剂，如检测产气荚膜杆菌Clostridiumperfrigens。

3、检测瓶的检测原理都分别用到了哪些检测方法？
答：培养皿法、酶法、免疫法、基因法。

4、对于第3题，你能简要叙述这些方法的优劣势么？
答：与传统的培养基法、胶体金、酶免法和PCR法不同，德国皇家微生物检测仪是多种方法的集合。单独使用一种检测方法都有自己的缺点：比如，PCR法需要专业技术人员和昂贵设备；培养基法操作复杂；胶体金法灵敏度低；酶免法特异性捕捉不充分。微生物快速检测系统是以上多种方法的综合运用，吸收了每种方法的优点，弥补了各种方法的不足。

5、用微生物检测瓶进行微生物检测时，第一步是先放样本还是无菌水？
答：都可以。

6、对样本进行微生物接种时，需要在无菌环境下进行么？
答：检测瓶是通过捕捉特异性，结合多种检测法进行分析。无菌环境与否均可（临检的场所大都是非无菌环境）。

7、检测瓶可以检测表面样本和固态样本么？
答：可以检测固态、液态、表面样本（用所配棉棒沾湿无菌水后涂抹表面）。纸浆等膏状、糊状、粘稠状昂本都可以检测。

8、检测瓶在检测固态样本时需要对进行研磨、稀释等前处理过程么？
答：直接将样本放入检测瓶，无需任何前处理。

9、每次检测的无菌水用量是多少？
答：一般是11ml。如果是检测液态样本或水样本，建议加样1ml，加无菌水10ml。

10、放入样本和无菌水后，“摇匀使其充分溶解和混合”这一操作步骤，无论定性分析还是定量分析，都是必要的步骤么？
答：是的，摇匀无论是定性还是定量分析都是必要步骤。

11、不同的微生物对应的孵育温度是一样的么?请举例说明。
答：不一样。37摄氏度居多：活菌总数、沙门氏菌、李斯特菌等，大肠杆菌44摄氏度等，详细请参考对照表。

12、若是检测冷菜或者冰欺凌这样的样本，孵育是否应该低温进行？
答：对检测样本自身的温度没有限制，检测样本中微生物，请严格遵照所检测微生物对应的孵育温度，可参考对照表。

13、如果想加快检测时间，孵育温度可以调至高于所检测微生物对应的孵育温度？
答：不可以，严格遵照对照表。

14、操作手册规定放入的样本量为多少？
答：0.1g‐1.0g或0.1ml‐1.0ml。

15、若放入的样本量高于规定的样本量，检测结果会不同，或者检测结果（定量时）增加么？
答：样本量多一些或少一些，定量分析结果不会有变化。
原因：传统的微生物学检测方法，包括官方参考方法，即基于固体选择性培养基的菌落计数法内在的统计分散度（统计名词，也称为统计变异，是变量或概率分布蔓延，常见的例子是方差，标准差和四分位距。）大于50%。很多实验室已经证实皇家生物检测法与其他检测方法比统计分散度低，可信度高。但不管怎样，25‐30%的统计分散度还是有的。另外，由采样产生的统计分散度同样应该考虑在内，尤其是微生物经常容易繁殖的固态的肉制品类。因此，加样是0.5g或1.5g所得的结果在统计上是等价的（和其他任何方法获得的结果相等）。

16、对于面粉这类低密度的散装样本，可以照常检测么？
答：可以。

17、对于酱油这样的深色样本，会影响定性检测结果的判读么？您有什么好的建议？
答：如果搭配检测仪进行定量分析，不存在这个问题；如果只是通过肉眼观察变色进行定性分析，深色样本如果担心肉眼不能够清晰的辨认，建议进行稀释后再进行检测。还记得第15题得答案么？加样是0.5g或1.5g所得的结果在统计上是等价的和其他任何方法获得的结果相等）。稀释同样的道理。

18、如果是检测水样，还需要加入无菌水么？加多少？
答：建议加水样1ml，无菌水10ml。

19、不同的微生物对应的开始颜色和呈阳性的颜色都相同么？请举例说明。
答：不同。例如，沙门氏菌孵育10分钟左右出现的开始颜色为红色，阳性颜色为黄色；李斯特菌，开始颜色为蓝色，阳性颜色为黄色。具体请参考对照表。

20、微生物检测仪兼备孵育机的功能么？
答：是的。将检测瓶充分摇匀后立即放入检测仪，在软件上进行检测菌类设置后，检测仪会自动进行孵育，并自动给出定量分析检测报告。

21、微生物检测仪兼备振荡器的功能么？
答：不具备。需用手用力摇2‐3分钟，或振荡器摇20秒左右，直至充分溶解或混合。

22、微生物检测仪的判读原理是什么？
答：微生物检测仪是一款精密的光学判读仪。通过光学原理精密探测检测瓶中的颜色变化，并给出精确的定量分析检测报告。

23、微生物检测仪是外接电源，还是自带充电电池？
答：两者都有。电池是标准的笔记本电脑电池，更换、维修方便。

24、微生物检测仪可以同时、独立地检测多少个检测瓶？
答：8个。同时、独立的探测，并分别给出定量分析报告。

25、微生物检测仪定量分析，需要在电脑上安装分析软件么？
答：需要按照配套分析软件。

26、怎样的计算机操作系统对该分析软件兼容？
答：XP，Vista，Windows7

27、如果检测仪是初次开机，接通电源后需要稍等多少时间再进行下一步操作？
答：若初次开机，开机后停留40秒左右继续操作为宜。

28、检测仪进行定量分析时，充分混合后的检测瓶是应该立即放入检测仪，还是稍等片刻后再放入？
答：充分混合后立即放入检测仪。

29、检测瓶放入检测仪后，在检测仪分析软件点击开始，软件界面上对应检测孔的灯会变成什么颜色？
答：在所检测检测瓶对应的操作界面上点击“Start”（开始），对应孔的指示灯由绿色变为红色，表明检测开始并进行中。

30、当检测结束后，分析软件界面对应孔的灯光会恢复为什么颜色，说明检测结束，可以放入新样本?
答：在检测进行时，指示灯为红色。当检测结束后，指示灯变为绿色。此时在对应的检测仪检测孔放入新的检测瓶开始下一轮检测是可以的。检测时间由细菌的存在量决定（当微生物含量较高时），或由对照表对应的检测时长决定（当微生物含量很低时，应超过对照表中检测1CFU对应的检测时间）。

31、微生物检测瓶的分析时间和检测瓶中微生物含量之间是什么关系？
答：反比关系。即微生物含量越多，对应的检测时间越短；微生物含量越少，对应的检测时间越长。如果样本中微生物含量过高，几分钟甚至几秒钟内检测仪的定量分析结果就会显著变动；如果微生物含量很低，（由于RVLM是非常精密灵敏的仪器）有经验的使用中可以通过几小时甚至几分钟的数据变化初步判断微生物目标含量是否达到规定要求。

32、分析检测前是否应该有明确的实验目的以确定要检测的微生物含量（根据国家标准规定微生物的存在量）？
答：这样是最好的。例如，根据国家GB标准，或根据国际EC标准等，都有明确（或部分明确）地注明微生物在不同家禽、畜牧物种中的允许最大存在量。具体地说，在进行微生物检测时，我们首先要明确检测目的。如、国际EC2073:2005标准中规定，大肠杆菌在鲜肉中允许的最大存在量为CFU10^2/g，即每克鲜肉中大肠杆菌的含量不允许超过CFU10^2。此时我们根据对招表，找到大肠杆菌所在列，查logCFU10^2=2，即在大肠杆菌行中找到数字2所对应第一列的数字为14。无论是肉眼进行定性分析，还是检测仪进行定量分析，要检测样本中大肠杆菌含量是否超过CFU10^2，最长在14小时即可得到严格精准的分析结果。如果是检测瓶进行定量分析，有经验的实验员会在很短时间内（譬如十几分钟）根据定量分析数据的动态变化情况，初步判断出检测瓶中的微生物含量。

33、明确要检测微生物含量的目的是什么，对照表起到什么作用？
答：是确定所检测微生物对应的孵育温度、开始颜色、分析时间、阳性颜色的标准对照的依据。具体的使用方法请参考上一题答案。

34、什么是CFU?
答：colony‐formingunit,菌落形成单位。经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。细菌（可见）和真菌的测量单位。CFU:colony‐formingunit,菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！传统上就叫“个”。但是，我们知道，一个菌落并不一定是一个细菌所生成，也可能是由一簇细菌（一个细菌团）所生成，这时候再叫“个”就不太准确啦，准确的叫法就是“菌落形成单位”，英文缩写“CFU”。就像“公斤”和“千克”，只是叫法不同，数量上没有变化。
    CFU代表“colonyformingunits”。CFU/mL指的是每毫升样品中含有的细菌群落总数，也有用CFU/g即对应固体培养基。

35、假如我要检测样本中大肠菌群的菌落含量不得超过106CFU/g或106CFU/ml，用肉眼观察瓶中颜色变化进行定性分析，请对照“孵育温度和比色对照表”详细叙述检测步骤。
答：第一步：放入样本
    放入所要检测的样本（0.1‐1.0g，或0.1‐1.0ml），加入11ml无菌水（根据检测物情况，若为液体，建议加样1ml，加无菌水10ml。差别不大），盖紧瓶盖。
    第二步：摇动瓶子直到溶剂充分溶解或混合。如果用手需有力摇2‐3分钟左右；或用振荡器摇，需时20秒左右。
    第三步：在适当时间判读检测结果
（1）若肉眼定性分析。根据对照表确定大肠菌群对应的孵育温度、开始颜色、检测时间、阳性颜色等信息。
    孵育温度：根据对照表为37℃；
    开始颜色：即摇匀后放入37℃恒温箱孵育10分钟左右会呈现的颜色。根据对照表为红色；
    检测时间：我们要检测标准为大肠菌群含量不超过106CFU/g或106CFU/ml。根据对照表，对应列log106=6，找数字6对应行的数字为6，即检测时间为6小时。即，观察时间确定为6小时。
    阳性颜色：根据对照表，大肠菌群的阳性颜色为黄色。
    确定了以下信息后，我们把充分混合后的检测瓶放入37℃恒温箱，这样一直放置。孵育10分钟左右，我们观察会发现检测瓶会呈现检测大肠菌群对应的开始颜色——红色。继续放置，到6个小时的时候进行观察，如果颜色变为黄色，说明样本中大肠菌群含量超过106CFU/g或106CFU/ml，样本为不合格品；若没有变为黄色，而是始终保持开始颜色红色，或其他中间颜色，说明样本中大肠菌群含量未超过106CFU/g或106CFU/ml，样本为合格品。
（2）若检测仪进行定量分析
    此步骤请参见下一题。
    第四步：无菌处理
    最后别忘记按下检测瓶的瓶盖上方对检测瓶进行灭菌处理。按下瓶盖后摇一摇，好了，可以安全丢弃了。
    注意：在进行实验操作时，不要碰到检测瓶的瓶盖顶部，以免在不当的时候进行了无菌处理，影响试验结果。

36、若第34题搭配检测仪进行精确的定量分析，请详述操作步骤。
答：（2）若检测仪进行定量分析
    将充分混合后的检测瓶立即放入检测仪。
    启动检测仪软件，点击“Station”（状态）录入相关信息（包括：检验员姓名、检测、检测样本所属客户、检测时间等信息）；在软件操作界面“analysistype”（检测种类）下拉菜单中勾选所检测的微生物种类，点击ok，点击开始，指示灯变红，
    开始进入分析状态。观察检测仪的定量分析数据变化，进行判断。

37、为什么在检测结束之前，不能按下检测瓶的瓶盖？
答：无菌处理。瓶盖中还有无菌处理物质，按下瓶盖，瓶盖中的无菌处理物进入瓶内，与瓶内溶剂进行反应，完成无菌处理。因此，实验过程中请不要轻易触碰检测瓶的瓶盖。