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Minimizing photobleaching of Blue Fluorescent Protein (BFP) using the Agilent Cary Eclipse fluorescence spectrophotometer

2024/02/22 16:06

阅读:29

分享:
应用领域:
生物产业
发布时间:
2024/02/22
检测样品:
生物能源
检测项目:
/
浏览次数:
29
下载次数:
参考标准:
/

方案摘要:

Introduction The term photobleaching refers to loss of fluorescence emission from samples due to prolonged exposure to exciting radiation. While many fluorophores retain stable fluorescence after extended periods of illumination, some photobleach after short periods of time. In order to maintain optimal fluorescence emission, it is important to minimize photobleaching. Strategies to achieve this usually involve limiting one or both of the following: (1) the time of exposure to, or (2) the intensity of, the exciting light. However, either of these strategies may compromise the quality of the results or limit the types of analyses that can be performed because the signal to noise ratio (S/N) is unavoidably decreased. Furthermore, kinetics-based assays performed over an extended period of time may not be possible due to increased exposure of the fluorophore to the excitation light which results in photobleaching.

产品配置单:

分析仪器

Agilent Cary Eclipse 荧光分光光度计

型号: Cary Eclipse

产地: 其他

品牌: 安捷伦

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方案详情:

Blue Fluorescent Protein (BFP) provides an example of a fluorophore that is susceptible to photobleaching: “…even with folding improvements, BFP still suffers from a relatively low fluorescence quantum yield [compared to green fluorescent protein] and relatively easy bleaching.” (Tsien, 1998)1. Despite the useful spectral properties of BFP for use in multi-labelling studies and techniques such as FRET (fluorescence resonance energy transfer),2 it is likely that its low quantum yield and susceptibility to photobleaching could limit ongoing detection in instruments that irradiate the sample continuously, or too intensely, or both. Accordingly, the present study aimed to determine whether using the Agilent Cary Eclipse fluorescence

spectrophotometer, which utilizes a special xenon flash lamp, photobleaching of BFP could be eliminated, or at least reduced, compared to other commercially available instruments having continuous or pulsed light sources.


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