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基于高通量荧光检测的 mAb 聚集体分析工作流程
2020/12/01 14:18
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent Cary Eclipse 荧光分光光度计
型号： Cary Eclipse
产地： 其他
品牌： 安捷伦
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Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱系统
型号： 1260 Infinity II Prime
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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OpenLAB 软件
型号： OpenLAB
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
本研究证明，Cary Eclipse 多孔板读数器和 PEPBOPS 染料可组成估算 mAb 聚集体含量的高通量工作流程。该工作流程可对高分子量聚集体进行半定量估算，每个样品只需约 5 秒。相比之下，更常规的测量技术通常需要约 5 分钟之久。
本研究使用两种治疗性 mAb（利妥昔单抗和曲妥珠单抗）和抗体标准品 NISTmAb RM 8671 对该工作流程进行测试。结果表明，该工作流程得到的结果与使用体积排阻色谱对相同样品进行正交测量得到的结果之间具有良好的相关性。本研究还表明，PEPBOPS 染料作为荧光探针加入样品中，并不会影响聚集。
研究证明该工作流程具有以下优势：
• 与采用 Bis-ANS 和 SYPRO Orange 的测定相比，背景信号显著更低，因此灵敏度更高
• 在聚集体百分比约 1% 至 ≥ 16% 的范围内，荧光信号与高分子量聚集体之间具有很强的线性相关性 (R2 ≥ 0.95)
• 聚集体测定准确度可达 ±0.62% (N = 4)
PEPBOPS 对样品的聚集特征或聚集体含量无明显影响在克隆筛选、先导化合物优化或制剂开发实验中，该工作流程对于快速识别聚集样品非常有用。用作 SEC 的前端流程时，该工作流程有望大幅缩短筛选时间，在维持高样品载量的同时提高总体分析效率。配备可选多孔板读数器的荧光光谱仪有助于我们灵活地开发分析方法和进行高通量筛查。
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