使用 Agilent 1260 Infinity 混合型 SFC/UHPLC 系统实现 USP 胆钙化醇正相 HPLC 方法向 SFC 的转移

摘要

Agilent 1260 Infinity 混合型 SFC/UHPLC 系统结合了 HPLC 的优势以及超临界流体色谱 (SFC) 的优点，可提供快速、可靠、环保、稳定且经济有效的解决方案。本应用简报将介绍美国药典 (USP) 胆钙化醇的正相 HPLC 分析方法向使用串联色谱柱的 SFC 方法的转移。HPLC 和 SFC 方法均在 1260 Infinity 混合型 SFC/UHPLC 系统上完成。结果表明，与 USP 方法相比，SFC 方法不仅符合系统适用性标准且分析速度提高 2 倍，溶剂成本更是减少了 26 倍。稳定性试验结果显示，SFC 方法具有良好的稳定性，适用于常规分析。

前言

胆钙化醇是维生素 D 的一种，也称为维生素 D3。胆钙化醇的 USP 分析方法为正相 HPLC 法，其包括分离胆钙化醇及其两个异构体：胆钙化醇前体和反式胆钙化醇。

USP 分析方法采用甲苯作为样品稀释溶剂，以无水己烷作为流动相。然而，暴露在浓度范围 10000 到 30000 ppm 的甲苯中将引起昏迷和死亡 (WHO, 1985)。己烷已列入美国毒性物质排放清单 (TRI) 中。相比之下，由于 SFC 使用的是无毒溶剂，并将二氧化碳 (CO2) 作为流动相的主要成分，因此是一种公认的绿色技术。与正相 HPLC 方法相比，SFC 法提供了更快速的分离，而且不影响柱效，柱平衡更快。在 SFC 中，由于流动相粘度较低，压降比 HPLC 低得多。从而能够将色谱柱串联，实现所需要的分离度。在 SFC 中使用串联柱获得更高柱效和分离度的可能性已得到确认。

本应用简报将介绍使用两根具有不同选择性的串联色谱柱开发一种可替代 USP 正相 HPLC 方法进行胆钙化醇分析的 SFC 方法。 1260 Infinity 混合型 SFC/UHPLC 系统是整合的一台仪器，HPLC 和 SFC 方法均在该仪器上完成。采用这种独特的混合型解决方案可避免投资两个独立的系统，从而排除了系统之间变异性的影响，大大节省了成本和实验室空间。

结论

我们用 Agilent 1260 Infinity 混合型 SFC/UHPLC 系统开发了新的 SFC 胆钙化醇分析方法，并将该方法与原 USP 正相 HPLC 方法进行了比较。采用串联色谱柱使胆钙化醇及其两个异构体得到了有效的分离。在符合系统适用性要求的情况下，SFC 方法比正相 HPLC 方法速度快 2 倍，成本节省 26 倍。另外，用两种方法对两组制剂中胆钙化醇的含量测定，给出了相似的结果。SFC 方法的线性和耐用性结果令人满意，LOD 值约为 4 ppm。另外，采用 SFC 方法不需要购买和消耗价格昂贵且对环境有害的化学试剂。因此，SFC 方法提供了一种快速、环境友好、经济有效的解决方案。