2018/10/18 14:02
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Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱解决方案
型号: 1290 2D-LC
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号: 1290 Infinity II Multisampler
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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方案详情:
摘要
当前,单克隆抗体和重组蛋白等蛋白质类生物药物广泛应用于治疗各种严重威胁人类生命的疾病,包括癌症和自身免疫性疾病。蛋白质治疗远远比小分子药物的治疗复杂,因此,阐明这种复杂性成为一个分析难题。
本文使用配备 DAD 检测器的 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案,论证了采用全二维液相色谱 (LCxLC) 分析单克隆抗体胰蛋白酶酶解物的应用潜力。
前言
在各种疾病的治疗中,由重组 DNA 技术制造的治疗性大分子正变得越来越重要。据估计,目前全球的蛋白质治疗市场(单克隆抗体 (mAb) 及其它重组蛋白质)占据大约全部医药市场的 20 %。未来十年内,批准的新药中超过 50 % 都将是生物药物。
在这些大分子的开发和使用期间,需要对它们进行深入表征。本文描述了一种用于单克隆抗体曲妥单抗的同一性和纯度评价的肽谱分析方法。曲妥单抗,商品名赫赛汀,是一个分子量为 150 kDa 的大分子,用于治疗HER2 阳性转移性乳腺癌。胰蛋白酶酶解后,预计会生成超过 100 种具有宽动态浓度范围的不同理化性质的肽(图 1)。这是一个复杂的分析难题,需要极高的分离性能。全二维 LCxLC 可以大幅提高色谱分离度,只要两维分离是正交的,那么在组分转移到第二维时也会保持其在第一维中获得的分离度。
本文报道了强阳离子交换 (SCX) 色谱联用反相液相色谱 (RPLC),对于肽的分析,该组合提供了良好的正交性。采用一个双定量环接口将馏分从第一维转移到第二维中,并保持原有(第一维中获得的)分离度。分析中使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案。我们强调了一些关键结果,并论证了系统的性能。
结论
对于蛋白质类生物药物等复杂样品的分析,Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案是一个理想的解决方案。该方法在纯度和同一性评价中具有极大潜力。该组合具有优异的精确性,我们可使用该方法对不同批次的产品,以及原研药和生物仿制药进行质量控制和比较研究。
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