人参皂苷的 UHPLC 新方法的开发

摘要

目的：使用带有自动方法开发/色谱柱筛选功能的超高效液相色谱(UHPLC) 系统对于人参皂苷类成分的适宜分离条件进行快速筛选及探索，并在此基础上优化得到快速高效重现性良好的定性定量分析方法。方法：使用自动方法开发系统对分离条件进行筛选和优化后，得到两种基于不同选择性条件的最终方法，方法1，色谱柱：Agilent Zorbax Bonus RP (3.0 x 50 mm，1.8 μm)，柱温25 °C，流动相为超纯水(A)-乙腈(B)，梯度分析，流速1.0 mL/min，检测波长203 nm；方法2，色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18（3.0 x 150 mm，1.8 μm），柱温50 °C，流动相为超纯水(A)-乙腈(B)，梯度分析，流速0.6 mL/min，检测波长203 nm。

结果：使用上述两个方法对标准品和样品进行了分析，所需分析时间均小于10 分钟，重现性良好，保留时间RSD < 0.2%，峰面积RSD < 1.0%，样品中的干扰成分与被测成分均可以得到良好分离。结论：两种方法分析快速切分离度良好，能够充分发挥UHPLC 的分离能力，适合于含有人参皂苷类成分的药材及制剂的分析。Agilent 的方法筛选软件可以快速、无人照管地选择最佳的色谱柱、色谱条件；使方法开发的步骤更趋系统化，更为合理。

前言

人参皂苷(Ginsenoside) 是一种固醇类化合物，三萜皂苷。主要存在于人参属药材中。人参皂苷被视为是此类药材中的活性成分，具有增加白细胞数量、提高人体免疫力、促进物质代谢、抗疲劳、抗衰老等作用，使用液相色谱方法分析此类成分是控制人参、三七等药材或含此类活性成分药品的重要手段，但是相关样品中的人参皂苷一般需要很长的分析时间，例如：中国药典的方法需要大概90 至120 分钟时间。UHPLC 技术的出现可以使液相色谱分析时间大为缩短，在不损失分离度的情况下大幅提高分析速度，目前已经广泛应用于中药分析领域。

在分析方法的开发过程中，通过改变色谱柱的种类，柱温等条件可以改变分离选择性，从而对较难分离的化合物进行更好的分析，在人参皂苷的分析中，Re 及Rg1 是一对比较难分离的成分，通常需要比较长时间（大概20 分钟）的等度或缓梯度先把这两个化合物分开，但是这会严重影响分析速度，延长分析时间。

在这篇文章中，我们使用了基于Agilent 公司的1260 或1290 超高效液相色谱系统的自动方法开发系统及软件对色谱柱和其他分析条件进行了自动筛选，并从中选出最适合人参皂苷分析的色谱柱及相应分析条件，并在此基础上进行改进和优化，最终得到了两个基于不同选择性特性的高效快速的分析方法，可分别用于不同的分析目的。通过这个研究，我们找到了人参皂苷在不同色谱柱上的色谱行为差异；同时也为类似的方法开发工作推荐一个有用的工具。

结论

使用方法开发系统及自动方法筛选软件，可以系统地开发新方法。通过对方法筛选结果的分析，找到了更适用于人参皂苷分析的色谱柱：Bonus RP。使用1.8 μm 颗粒、50 mm 长的Bonus RP 超高效液相色谱柱开发了分析时间仅需6 分钟的超高效液相色谱方法。该方法重现性良好，通过对各种有代表性样品的分析，证明这个方法对各种样品都具有很好的分离度，杂质干扰也很小。

同样根据方法筛选的结果，开发了另一种分析人参皂苷的方法。这第二种方法使用极其经典、耐用的Agilent Zorbax SB-C18 柱，在较高色谱柱温度、更高的起始有机溶剂比例的条件下，用线性梯度在10 分钟内也完成了人参皂苷的分析。因使用线性梯度、1.8 μm 颗粒、150 mm 长的超高效色谱柱，提供更高的分离能力。