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测定血清纯化所得的抗体药物偶联物的药物/抗体比率——应用自动亲和纯化、LC/MS 分析和新型 DAR 计算软件
2018/09/06 14:55
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent AssayMAP Bravo 蛋白质样品前处理平台
型号： AssayMAP Bravo
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
前言
抗体药物偶联物 (ADC) 是一类新兴生物治疗药物，旨在通过将药物与单克隆抗体相连实现靶向给药。与小分子药物不同，ADC 不是单分子实体，而是一类异质性的抗体，每种抗体所携带的药物数量以及经历的翻译后修饰都各不相同。药物/抗体比率 (DAR) 是指 ADC 偶联的药物的平均数量。DAR 是 ADC 开发过程中需要优化和密切监测的关键质量属性，因为它将影响疗效和毒性。
由于药物的释放，在血液循环中 ADC 的 DAR 将随时间发生变化。因此，制定一套测定药代动力学 (PK) 研究样品中 ADC DAR 的稳定解决方案非常关键。要确定 ADC DAR，首先必须纯化血清中的 ADC，然后使用 LC/MS 对其进行分析。通常该工作流程中的样品前处理和数据分析环节需耗费大量人力，因此易受变异性和人为误差影响。
本应用简报介绍了一种用于测定血清样品中 ADC DAR 的解决方案，该方案采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台对 ADC 进行自动亲和纯化；将 Agilent 1290 Infinity UHPLC 与Agilent 6550 Q-TOF 质谱仪联用，用于采集准确的完整蛋白分子量数据；并利用 Agilent MassHunter BioConfirm 和 DAR 计算器软件确定 ADC 质量和 DAR。该工作流程可节省人力、降低变异性以及减少产生与 ADC DAR 测定相关的人为误差的可能性，而且仅需很少的工作量即可扩展样品处理量。
结论
安捷伦为您提供了一套全面的 ADC DAR 测定解决方案，包括使用 Agilent AssayMAP Bravo 进行自动亲和纯化；使用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 和 Agilent 6550 Q-TOF 采集 LC/MS 数据；使用 Agilent MassHunter BioConfirm 软件进行解卷积处理，以及使用Agilent MassHunter DAR 计算器确定 DAR。
该 ADC DAR 测定解决方案的优势在于：
• 节省人力，降低变异性并减少可能引入的人为误差
• 提高血清 ADC 纯化操作的产率和纯度
• 生成高分辨率的谱图
• 轻松完成 DAR 计算
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