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用于 mAb 和 ADC LC/MS 分离的 PLRP-S 聚合物型反相色谱柱——完整和片段化 mAb 与 ADC 的分析
2018/08/31 16:01
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产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统
型号： 6470
产地： 新加坡
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
摘要
本应用简报介绍了聚合物型反相色谱柱在单克隆抗体 (mAb) 和抗体药物偶联物 (ADC) 等生物大分子表征中的应用。通过研究完整和片段级 mAb 了解聚合物色谱柱的性能。结果表明该色谱柱具有卓越的分离性能，并适用于 mAb 和 ADC 的常规 LC/MS 分析。
前言
单克隆抗体 (mAb) 和抗体药物偶联物 (ADC) 是具有异质性的治疗分子。药物开发过程中可对这些分子进行各种修饰，因此需要全面的表征来确保安全性和药效。反相液相色谱与质谱检测结合最常用于 mAb 和 ADC 的初步表征。选择正确的液相色谱柱和方法对于获得可重现的高分离度分离和高质量质谱数据至关重要。通常，在传统硅胶反相色谱柱的流动相中使用甲酸（FA，一种可用于质谱的离子对试剂）可导致总离子流图 (TIC) 峰形变差，从而影响 LC/MS 结果（分离度、灵敏度、质谱信号、准确分子量信息等等）。因此，液相色谱柱必须与甲酸条件兼容，以便改进生物大分子的LC/MS 分析。
本研究使用聚合物型反相色谱柱 (Agilent PLRP-S) 展示了 mAb 和 ADC 的 LC/MS 分析。PLRP-S 柱含有硬质、大孔的球形聚苯乙烯和二乙烯基苯填料。这些填料在整个 pH 范围内具有物理和化学稳定性。这些填料本质上是疏水的，因此既没有键合相也没有烷基配体需要进行反相分离，从而确保了这种高重现性材料不含硅醇基与重金属离子。本文使用 PLRP-S 色谱柱结合 LC/MS 方法对 ADC 等多种治疗性 mAb 进行了分析。该方法可获得更好的 LC/MS 结果，可实现完整和片段化 mAb 与 ADC 的精确质量数测定。
结论
• Agilent PLRP-S 色谱柱对完整和片段级 mAb 和 ADC 的分析表现出卓越的分离性能
• Agilent PLRP-S 采用含有甲酸的流动相，可提供更高的色谱性能和高质量质谱响应
• 本文展示了 Agilent PLRP-S 色谱柱联用 Agilent 6530 精确质量数 Q-TOF LC/MS 系统对 mAb 和 ADC 的分析
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