利用配备二极管阵列检测器的高效液相色谱分析吐温 80

摘要

吐温 80 通常用作药物中的稳定剂，或用于组织处理的抗钙化剂。吐温 80 是不均匀混合物，且缺乏良好的发色团，定量分析具有挑战性。本研究使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和 Max Plot 二极管阵列检测器 (DAD) 开发出一种简单快速的高效液相色谱 (HPLC) 分析方法，用于分析溶于 0.02 mol/L 磷酸盐缓冲液中的吐温 80。基于吐温 80 洗脱区域中色谱峰的峰面积总和进行定量测定。经方法学评估，其精度、准确度、线性和定量限/检测限实验均得到了可接受的结果。这种方法可用于对含吐温 80 的各种水溶液进行质量控制和稳定性监测。

前言

吐温 80 也称为聚山梨酯 80，是一种常用的非离子表面活性剂、乳化剂、稳定剂和增溶剂，广泛用于药物、食品、化妆品、维生素、疫苗、静脉制剂、洗剂和肥皂中。在蛋白质制剂中，吐温 80 及其他聚山梨酯可最大程度减小表面吸附，降低蛋白质变性的速率，并提高药物的溶解性和稳定性。吐温 80 也可用于心脏瓣膜组织制备中，戊二醛前、后组织处理（固定）的抗钙化剂。鉴于这些关键作用，需要准确定量吐温 80 以确保产品质量。

吐温 80 是脂肪酸（主要是油酸）偏酯与山梨糖醇及其酸酐乙氧基化（每摩尔山梨糖醇和山梨酸酐用 20 摩尔左右环氧乙烷进行乙氧基化）的混合物。作为大分子化合物，由于混合物不均匀且缺乏紫外发色团，因此难以对聚山梨酯进行定量分析。文献中描述了聚山梨酯 80 的几种定量分析方法。已经报道了基于聚山梨酯 80 化学转化的间接方法，如碱诱导水解成油酸。这些方法费时费力，包括在 40 °C 至 60 °C 的高温下消解 6 至 18 小时。也有将 HPLC分离与不同检测方法（如蒸发光散射检测 (ELSD)、电喷雾检测 (CAD)和质谱(MS）联用，开发出几种吐温 80 的直接分析方法。一些研究人员试图不分离并用单一色谱峰进行定量分析。这些方法可能需要复杂的仪器，而且可能无法用于监测吐温 80 溶液的稳定性。

本研究介绍了一种用于测定水溶液中吐温 80 的简单快速的方法，该方法基于 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和二极管阵列检测器进行反相 HPLC 分离。通过测试其专属性、线性、精度、灵敏度和准确度来评估该方法用于测定磷酸盐缓冲液中吐温 80 的适用性。这种方法为科学家提供了一种理想选择，因为二极管阵列检测器比 ELSD、CAD 和MS 检测器更常用于 HPLC 分析。

结论

本研究开发出一种简单快速的 HPLC 分析方法，分析溶于 0.02 mol/L 磷酸盐缓冲液中的吐温 80，该方法使用 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和 Max Plot 二极管阵列检测器 (DAD)。该方法准确、精密而灵敏。如采用适当的样品预处理，较宽的校准范围可以使该方法应用于各种水溶液（如治疗性蛋白质制剂）。此外，该方法可用于研究吐温 80 溶液的稳定性。