使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 净化产品对人血浆和血清中的滥用药进行 LC/MS/MS 定量测定

摘要

Agilent Captiva 增强型脂质去除产品 (EMR-Lipid) 是第二代 EMR 产品，采用便捷的 SPE 过滤柱或 96 孔板。本研究采用 96 孔板形式对人血浆和血清中的 24 种代表性滥用药进行 LC/MS/MS 定量测定。样品的前处理方法为：采用孔内蛋白质沉淀法 (PPT) 去除蛋白质，接着采用 Captiva EMR-Lipid 净化产品去除脂类。整个样品处理在 96 孔板中作为一个批处理执行，并通过离心和正压歧管验证样品的洗脱。整个批次流程简单易用，能够在两小时内完成样品板中 96 个样品的前处理。高效基质净化产品使磷脂去除率高于 99%，从而减小了基质离子抑制效应和系统污染。通过准确度和精密度的运行实现定量方法的验证，在三个 QC 浓度下均获得了优异的准确度 (100% ± 20%) 和精密度 (RSD < 20%)。血浆和血清中的定量限 (LOQ) 为0.1–0.5 ng/mL，且线性校准曲线的 R2 > 0.99。用通常的人血基质（包括含各种抗凝血剂的血清和血浆）对该方法进行了交叉验证。

前言

在法医毒理学中，对快速可靠地筛查和定量测定生物样本中的滥用药 (DoA) 的需求正在不断增加。主要原因是滥用药以及提交分析的样品数量日益增多。使用血液基质有以下几个优势：首先，药物一经摄入，能够在体内代谢或过滤之前立即进行检测。其次，由于生理参数的变化范围非常窄，血液相对均匀。再次，许多欧洲国家和美国一些州，在要求药驾 (DUID) 测试时指定用血液样品。因此，可靠地定量测定血液基质中的 DoA 对于常规毒理学分析非常重要。

用于系统毒理学分析的样品前处理方法包括液液萃取 (LLE)、固相萃取 (SPE) 和固相支持液液萃取 (SLE)。然而，这些方法费力费时，并需要使用大量有毒溶剂。安捷伦增强型脂质去除产品 (EMR-Lipid) 所用的吸附剂是一种新型材料，能够选择性去除样品基质中的主要脂类且不会造成分析物损失。其脂质去除机制是基于脂质与 EMR 吸附剂之间的体积排阻和疏水相互作用。第二代 Captiva EMR-Lipid 吸附剂以 SPE 过滤柱/板形式包装，只需对样品进行直通式洗脱即完成净化，留在溶液中的溶质可供分析。研究表明，使用 Captiva EMR-Lipid 96 孔板进行孔内蛋白质沉淀 (PPT)，随后进行直通式净化，能够有效去除生物体液中的磷脂，并实现人血清中代表性药物的定量测定。

在之前的研究中，建立了孔内 PPT 和 Captiva EMR-Lipid 板净化的方法，并针对人全血中流行的 DoA 分析进行方法验证。本研究中，将一种类似的方法应用到不同的血液基质（包括血清和血浆）中。目标分析物的化学特性和结构列于之前的应用简报中。该方法采用了一天的准确度和精密度测试以及分析物回收率和基质效应评估，就每种血液基质进行了交叉验证。

结论

在人血液基质中 24 种代表性 DoA 化合物的定量测定中，对一种使用孔内蛋白质沉淀和 Captiva EMR-Lipid 净化产品的样品前处理方法进行了交叉验证。对每种血液基质进行一天的准确度和精密度评估，证实该方法能够成功转移到其他基质。采用 96 孔板形式开发的方案适用于高通量实验室对快速、可自动化的样品前处理方法的需求，便捷的孔内 PPT 和 Captiva EMR-Lipid 净化产品简化了工作流程，同时仍可提供高效的样品提取和脂质净化。更干净的分析样品还可缩短清洗检测系统所耗的时间，提高样品检测通量。首先添加血浆或血清样品再添加沉淀溶剂的蛋白质沉淀方法，可改善样品混合的均匀性，这样，易去除蛋白质并减少转移步骤。